Was ist Peptidreinigung?
Peptide sind kleine Polymere aus Aminosäuren. Viele sind biologisch aktiv wie Hormone, Toxine oder andere Fähigkeiten. Solche Verbindungen werden häufig in der biologischen, medizinischen und chemischen Forschung verwendet. Sie dienen auch als Bausteine von Proteinen, wenn die Anzahl von ihnen miteinander verbunden ist. Die Peptidreinigung ist eine Technik, mit der entweder große Mengen eines gewünschten Peptids oder zur Trennung von Peptiden, die aus der Verdauung von Proteinen erzeugt werden, zu trennen. Hochdruck -Flüssigkeitschromatographie (HPLC) wird üblicherweise zur Peptidreinigung verwendet. Das Peptid oder die Peptide werden in einer Mischung aus Lösungsmitteln angewendet, die sich im Laufe der Zeit ändert, wenn sie bei hohem Druck über eine Säule mit kleinen Perlen gepumpt werden. Verschiedene Peptide sind zu unterschiedlichen Zeitpunkten reichen und werden von einem Monitor festgestellt, häufig ein UV -Spektrophotometer.
Bei der Durchführung von Forschungen zu Peptiden ist häufig der Interessensubstanz selten und kann nicht von chemischen Unternehmen gekauft werden. Wenn die Struktur des gewünschten Peptids bekannt ist, ist es häufig einfacher, sich chemisch durch Peptidsynthese vorzubereiten, als die Verbindung aus natürlichen Quellen zu isolieren. Die Isolation von natürlichen Produkten ist notorisch schwierig. Synthetische Peptide werden im Allgemeinen durch HPLC gereinigt.
Eine solche chemische Synthese kann für einen unabhängigen Forscher, der kein Chemiker ist, entmutigend sein. Häufig wird diese Aufgabe an Peptid -Syntheseunternehmen, die sich auf diese Techniken spezialisiert haben, vergeben. Dies kann wirtschaftlicher sein, als zu versuchen, das System in einem Labor von Grund auf neu einzurichten. Peptidunternehmen können kundenspezifische Peptide auf die Bedürfnisse des Forschers zugeschnitten machen.
Ein weiterer Grund für die Peptidreinigung kann sein, wenn ein Forscher ein Protein gereinigt hat und versucht, seine IDEN zu bestimmenTität. Er oder sie kann das Protein in Peptidfragmente abbauen, die Fragmente durch Reinigung trennen und das Fragmentierungsmuster der Peptide haben, die durch ein Massenspektrometer nachgewiesen werden, wenn sie aus der Säule ausgehen. Diese Technik ist als LC-MS bekannt und kurz für die Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie. Es gibt das Molekulargewicht und die Aminosäurezusammensetzung der Fragmente und ermöglicht häufig die Identifizierung von Proteinen, wenn ähnliche oder identische zuvor identifiziert wurden.
Viele Forscher arbeiten mit Peptiden mit neuartigen Merkmalen wie unnatürlichen Aminosäuren, um zu versuchen, solche mit ungewöhnlichen biologischen Aktivitäten zu finden. Es gibt ein ganzes Feld namens Peptidomimetika, das der Untersuchung solcher neuartigen Peptide gewidmet ist. Oft werden computergenerierte Sequenzen entworfen und eine Peptidbibliothek wird synthetisiert, die eine Reihe atypischer Peptide umfasst. Die Peptidreinigung wird verwendet, um einzelne Mitglieder dieser Bibliothek zu trennen, um ein reines Peptid für biologische Akti bereitzustellenVity. Diese Strategie hat erfolgreich mindestens ein neues kommerziell verfügbares Medikament generiert.
Viele der biologisch aktiven Peptide sind für medizinische Zwecke von Interesse. Verbindungen, die kommerziell wie Insulin verwendet werden, werden üblicherweise durch rekombinante DNA -Überexpressionssysteme erzeugt, die große Mengen der gewünschten Verbindung erzeugen. Häufig werden die Peptide gentechnisch konstruiert, um die Reinigung zu erleichtern, indem an ihren Fronten eine Art Tag hinzugefügt wird. Dies ermöglicht die Verwendung der Affinitätschromatographie, das Peptid zu reinigen.
Mit dieser Art von Chromatographie ist das Tag eine Verbindung wie Histidin, die eine Matrix von Perlen bindet, wie Nickel, die für seine Fähigkeit zur Bindung des Tags ausgewählt wurden. Unerwünschte Proteine und Peptide gehen im Allgemeinen ohne Bindung durch die Säule. Das spezifisch gestaltete Peptid bindet normalerweise stark an die Säule. Nachdem die kontaminierenden Proteine und Peptide abgespült wurdenBindung an die Matrix. Man hat dann eine ziemlich reine Vorbereitung des gewünschten Peptids, und das Tag kann durch Spaltung entfernt werden.