Jak funguje bakteriální testování endotoxinu?

Testování bakteriálního endotoxinu obvykle zahrnuje použití činidel, která při smíchání v roztoku s možným kontaminantem způsobují reakci, což znamená přítomnost endotoxinu.Chromogenní testování, test gelového sraženiny a testování turbidimetrického testu jsou metody, které vědci běžně používají pro testování bakteriálního endotoxinu.Technici používají tyto metody hodnocení na různých látkách a objektech při kontrole kontaminace endotoxinu.Voda, suroviny používané při výrobě léků, vybavení a obalu musí procházet standardy endotoxinu.

Bakterie, houby a viry mají ochranné vnější membrány sestávající z lipopolysacharidů, také označovaných jako LPS.Lipidová část těchto řetězců obsahuje endotoxiny.Tyto látky obecně zůstávají uvnitř membrány, ale uvolňují se během procesu dělení buněk a během destrukce buněk nebo lýzy.U lidí tyto látky způsobují horečku, abnormální koagulaci, septický šok a další příznaky, i když na rozdíl od exotoxinů v buňce se endotoxiny nepřevádějí na toxoid.Obecně mikrobiologové kontrolují přítomnost endotoxinů spojených s různými gramnegativními bakteriemi, včetně e.coli .

Test gelového sraženiny nebo test Limulus ameboecyte lyzát (LAL) zahrnuje použití chemikálie ničící membránu odvozující se z amébocytů podkovského kraba, které také označují pozitivní indikaci endotoxinůnebo gelling dochází, když je lyzát vystaven dotyčnému předmětu nebo látce.Mikrobiologové obvykle používají tuto metodu testování bakteriálního endotoxinu ve spojení s chromogenním a turbidimetrickým testováním na přesvědčivé výsledky.Když tento lyzát kontaktuje endotoxin, reakce vytváří specifickou barvu.Poslední testovací proces zahrnuje měření zákalu nebo oblačnosti řešení.Technici vystavují roztok vytvořený v testu gelové sraženiny spektrofotometru, který vydává paprsek světla.Měřením ztráty intenzity světla v paprsku, když prochází roztokem, mohou mikrobiologové určit, zda je přítomen endotoxin. Laboratorní spolupracovníci obecně dokončují tyto tři bakteriální endotoxinové testy dvakrát nebo třikrát, aby se zajistily přesné výsledky.Gelový test se nepoužívá výhradně, protože jeho nejnižší limit detekce je 0,03 jednotek Ehrlich na mililitr (EU/ml).Chromogenní a turbidimetrické testování detekují endotoxiny v rozsahu 0,005 EU/ml.Bezpečnostní parametry se velmi liší v závislosti na testované látce.Zatímco sterilní voda používaná pro účely injekce nebo zavlažování nemůže obsahovat ne více než 0,25 EU/ml, sterilní voda pro inhalační účely může obsahovat až 0,5 EU/ml.