Co je to severní blot?

Hybridizace Northern Blot je technika, která se používá k detekování hladin messenger RNA (mRNA) ve vzorku a kvantifikaci množství mRNA, která je přítomna.Ačkoli existují další silnější techniky, Northern Blot zůstává standardem kvůli jeho jednoduchosti a snadnému použití.Technika severního blotu také umožňuje přímé srovnání více vzorků v jednom experimentu.

Messenger RNA je typ nukleové kyseliny, která se produkuje při exprimování genu.Gen, který je zapnutý a funkční v buňce, je přepsán do mRNA.MRNA je poté transportována do cytoplazmy buňky, kde je přeložena do proteinu.Northern blot analýza vzorku buněčné mRNA proto může poskytnout užitečné informace o řadě proteinů, které buňka produkuje.být oddělen podle velikosti.Vzorky molekul mRNA známých velikostí jsou prováděny současně za účelem zajištění kontroly.Po dokončení elektroforézy jsou vzorky přeneseny a imobilizovány na pevné membráně, obvykle vyrobené z materiálu, jako je nylon.Vzorky jsou poté vystaveny radioaktivně značeným sondám po dobu několika hodin před analýzou.Během analýzy může být mRNA, která se hybridizovala na radioaktivně značenou sondu, jasně detekováno pomocí rentgenu.

Technika severního blotu umožňuje pozorování vzorců genové exprese mezi různými typy tkání.Messenger RNA extrahovaná z buněk různých tkání a typů orgánů lze porovnat a lze zkoumat buněčné reakce na stres, infekci a mnoho dalších podnětů.Při pohledu na rozdíly v expresi mRNA za různých podmínek může vědec určit, jaké typy proteinů, které buňka produkuje v reakci na určité podněty.To může poskytnout vodítka o funkcích neznámých proteinů nebo v případě známých proteinů informace o buněčných reakcích na dané podněty.

Například severní blot může ukázat, že exprese neznámého proteinu se zvyšuje v reakci na přítomnost specifického toxinu.Potom by se dalo teoretizovat, že protein je zapojen do snižování toxicity, snad transportem chemikálie z buňky nebo přeměnou na metabolit.Pokud jsou zkoumány známé proteiny, dokumentace změn exprese proteinu může poskytnout informace o samotné odpovědi.Pokud byla zvýšena exprese známého molekulárního transportéru, lze například potvrdit, že buněčná reakce na toxin má transportovat toxin z buňky.