Co je čištění peptidu?

Peptidy jsou malé polymery složené z aminokyselin.Mnoho z nich je biologicky aktivní jako hormony, toxiny nebo mají jiné schopnosti.Takové sloučeniny se často používají v biologickém, lékařském a chemickém výzkumu.Slouží také jako stavební bloky proteinů, když jsou jejich počet spojen.Čištění peptidu je technika používaná buď k čištění velkých množství požadovaného peptidu, nebo pro pomoc oddělené peptidy generované z trávení proteinů.odlišně k fyzické matici.Pro čištění peptidu se běžně používá vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC).Peptid nebo peptidy se aplikují ve směsi rozpouštědel, která se v průběhu času mění, když jsou čerpány přes sloupec malých kuliček při vysokém tlaku.Různé peptidy elují v různých časových bodech a jsou detekovány monitorem, často UV spektrofotometrem.Pokud je struktura požadovaného peptidu známa, je často snazší připravit se chemicky syntézou peptidu než izolovat sloučeninu od přírodních zdrojů.Izolace přírodních produktů je notoricky obtížná.Syntetické peptidy jsou obecně purifikovány HPLC.Tento úkol je často uzavřen na společnosti pro syntézu peptidů, které se specializují na tyto techniky.To může být ekonomičtější než pokusit se nastavit systém od nuly v laboratoři.Peptidové společnosti mohou vytvořit vlastní peptidy přizpůsobené potřebám výzkumného pracovníka.Může degradovat protein na peptidové fragmenty, oddělit fragmenty čištění a mít fragmentační vzorec peptidů detekovaného hmotnostním spektrometrem, když elují ze sloupce.Tato technika je známá jako LC-MS, krátká pro spektrometrii kapalinové chromatografie.Poskytuje molekulovou hmotnost a aminokyselinové složení fragmentů a často umožňuje identifikaci proteinů, pokud byly dříve identifikovány podobné nebo identické.Zkuste najít ty s neobvyklými biologickými činnostmi.Existuje celé pole zvané peptidomimetika věnovaná studiu takových nových peptidů.Často jsou navrženy počítačově generované sekvence a syntetizována je peptidová knihovna, která zahrnuje řadu atypických peptidů.Čištění peptidu se používá k oddělení jednotlivých členů této knihovny k poskytnutí čistého peptidu pro testování biologické aktivity.Tato strategie byla úspěšná při vytváření alespoň jednoho nového komerčně dostupného léku.Sloučeniny používané komerčně, jako je inzulín, se běžně vyrábějí systémy nadměrné exprese DNA, které vytvářejí velká množství požadované sloučeniny.Peptidy jsou často geneticky vytvořeny tak, aby usnadnily čištění tím, že se do jejich front přidaly nějaký druh značky.To umožňuje použití afinitní chromatografie k čištění peptidu.

S tímto typem chromatografie je značka sloučenina, jako je histidin, která bude vázat matici korálků, jako je nikl, zvolená pro svou schopnost vázat značku.Nežádoucí proteiny a peptidy obecně procházejí kolonou bez vazby.Speciálně navržený peptid se obvykle silně váže na sloupec.Po omytí kontaminujících proteinů a peptidů je požadovaný peptid eluován sloučeninou, která soutěží o vazbu na tmatice.Jeden pak má poměrně čistou přípravu požadovaného peptidu a značku lze odstranit štěpením.