Hvad er et ubiquitinationsassay?

Ubiquitination henviser til bindingen af protein ubiquitin til andre proteiner med tre forskellige enzymer.Et ubiquitinationsassay er en test, der bestemmer, hvor meget af denne proces der opstår i cellen.Tests kan bruges til at bestemme, hvordan forskellige tilstande påvirker proteinbinding, trin og strukturer, der er vigtige i ubiquitinnationsvejen, og mængden af protein i cellen.Utilstrækkelige eller overværdige mængder er blevet knyttet til udviklingen af mange forskellige sygdomme.

Et protein, der findes i celler, er funktionen af ubiquitin at binde til proteiner, mens den fungerer som et tag eller signal til andre strukturer.Dette tag signalerer derefter enzymer til at vide, at proteinet kan ødelægges, genanvendes eller flyttes.Resultatet er ødelæggelse eller transport af proteiner.

Disse mærkningsproteiner er vigtige for DNA -reparation, virusinfektioner og immunrespons.Andre vigtige funktioner inkluderer roller i celledød, cellulær opdeling og udvikling af celler.For meget ubiquitin eller mangel på dem kan spille en rolle i dannelsen af mange sygdomme, såsom kræft, genetiske lidelser og sygdomme i immunsystemet.

Forskere vil bruge et ubiquitinationsassay til at forsøge at bestemme, hvilke betingelser der ændrer koncentrationen af proteinet i cellen og sammenligner syge celler med sunde celler.Forskere bruger det også til at undersøge, hvilke betingelser der vil forårsage ændringer i binding.Derudover kan de forsøge at forbinde specifik DNA -kode med mængden af enzymer i cellen.

Der er mere end en type ubiquitinationsassay, som forskere specifikt bruger.Man vil bestemme procentdelen af proteiner, der er bundet med ubiquintin.En anden undersøger aktiviteten af enzymer eller tilstedeværelsen af andre mellemprodukter, der findes i ubiquineringsvejen.Forskellige assays er udviklet baseret på målproteinet, som ubiquitin vil binde til.

Grundlaget for et ubiquitinationsassay er at inkorporere en forbindelse, der er mærket ved hjælp af et andet let målt kemikalie.I onkologiske assays kan ubiquitin mærkes med kryptat, en forbindelse, der indeholder to nitrogenatomer.Dette kan bruges til at bestemme, hvilket enzym der er mest aktiv i cellen.

Et ubiquitinationsassay vil have to trin.Den første er et enzymatisk trin, hvor enzymer binder det mærkede ubiquitin til målproteinet.Det andet er et detektionstrin, hvor binding af målproteinet undersøges under anvendelse af et konjugat, såsom et antistof.Antistoffet vil fluorescere eller ændre farve, som derefter giver forskeren mulighed for at bestemme enzymernes aktivitet.