Hvad er fluorescerende in situ -hybridiseringsteknik?
Fluorescerende in situ -hybridisering, også kendt som fluorescens in situ -hybridisering, kaldes mere almindeligt fisk.Det er en teknik, der involverer anvendelse af en kort del af DNA mærket med et fluorescerende farvestof til at påvise genetiske abnormiteter.FISH giver efterforskere mulighed for at visualisere kromosomer, dele af kromosomer eller specifikke gener hurtigt og nøjagtigt.Dette bruges ofte til at bestemme prognosen og behandlingen for visse sygdomme, især kræftformer.
Fisk bruges til at bestemme, om kromosomer har abnormiteter.Dette kan omfatte kromosomale deletioner, omarrangementer eller translokationer, hvor to kromosomer har skiftet segmenter.Fisk giver også efterforskere mulighed for at visualisere specifikke gener.Det kan bestemme, om et bestemt gen er til stede, hvor det er placeret på kromosomerne, og om der er flere kopier.Dette kaldes genkortlægning.
Den genetiske sammensætning af en person er indeholdt i deres DNA, som er placeret i kernerne i alle deres celler.DNA har to tråde, der er gratis for hinanden.Med andre ord har de molekyler kaldet basepar, der matcher nøjagtigt.Gener er segmenter af DNA, der har en bestemt sekvens af basispar og er placeret på specifikke områder af kromosomer.Gener er arvet og bestemmer, hvordan celler fungerer, men de kan også blive muteret, hvis sekvensen af DNA -basispar ændres.
Den fluorescerende in situ -hybridiseringsteknik drager fordel af den gratis karakter af DNA -strenge.Efterforskere opretter først en sonde.Dette er en kort, enkelt Strand af DNA, der er gratis til den genetiske sekvens, som efterforskeren leder efter.Proben mærkes eller fastgøres derefter til et fluorescerende farvestof.
Celler fra sygt væv, såsom en tumorbiopsi, udgør normalt prøven, der skal undersøges af fisk.Prøven opvarmes til at denaturere DNA'et i cellernes kerner.Dette betyder, at de dobbelte strenge af DNA i prøvecellerne går i stykker for at danne enkeltstrenge.En specifik fiskesonde hybridiseres derefter med prøven.Med andre ord introduceres sondens enkeltstreng og smelter sammen med sin gratis enkeltstreng i de denaturerede prøveceller.
Ved hjælp af et specielt fluorescerende mikroskop ser forskeren på prøven.Hvis det specifikke gen eller kromosom er til stede i prøvecellerne, vises det som et fluorescerende lys på en mørkere baggrund.Forskere kan let se, om genet er til stede eller ej, og om det er, hvor mange kopier af genet der er i hver celle.Hvis forskeren leder efter placeringen af et gen, kan han eller hun se, hvor på kromosomet det er.Et regelmæssigt lysmikroskop kan ikke bruges med fisk, fordi det fluorescerende farvestof afgiver et meget lavt lysniveau.
Anvendelse af DNA -hybridisering med sonder blev først opnået i 1960'erne;Imidlertid blev sonderne mærket med radioaktive stoffer snarere end fluorescerende.Dette havde flere problemer.Radioaktive stoffer er i sagens natur ustabile, farlige og kræver særlige protokoller til bortskaffelse.Det tager også lang tid at måle det radioaktive signal, der udsendes af den hybridiserede sonde.Den fluorescerende in situ -hybridiseringsteknik overvinder de fleste af disse hindringer.
Hvis efterforskere ved, hvilket gen de leder efter, er fisken hurtig og nøjagtig til at finde det.Fisk kan også udføres, selvom celler ikke aktivt opdeler, og det giver mere specifik information om abnormiteter i kromosomer.Flere konventionelle teknikker, såsom karotyping, fortæller blot efterforskere antallet og størrelsen af kromosomer i en celle.
Fluorescerende in situ -hybridisering har ulemper.Da nøglen til fisk er at kende basisparets sekvens og/eller placering af et gen, kan det ikke bruges som et generelt screeningsværktøj.Det er også dyrere end andre, mindre specifikke teknikker og er muligvis ikke tilgængelige i alle laboratorier eller hospitaler./p
Fordelene og ulemperne ved fluorescerende in situ -hybridisering er bedst beskrevet som et eksempel.Fisk anvendes rutinemæssigt i diagnose af brystkræft til at bestemme, om en patient har flere kopier af et gen kaldet HER2.Dette indikerer normalt en mere aggressiv form for brystkræft, og at patienten skal modtage visse medicin som en del af deres behandling.Fisk kan bruges til dette, fordi basisparets sekvens og kromosomal placering af HER2 -genet er kendt.I modsætning hertil kan fisk ikke bruges til at bestemme, hvad ukendt gen eller gener har forårsaget brystkræft eller til at screene for brystkræft generelt.