Hvad er 2D gelelektroforese?

To-dimensionel (2D) gelelektroforese er en metode, som forskere bruger til at adskille og analysere proteinblandinger ved først at adskille bånd af proteiner langs to forskellige akser.Det er en teknik, der oftest bruges, når man håndterer komplicerede eller tykke blandinger af proteiner, ofte med overlappende størrelser af proteiner.2D gelelektroforese adskiller sig fra en-dimensionel gelelektroforese, fordi den tidligere metode anvender adskillelse af proteiner baseret på to forskellige proteinegenskaber, medens en-dimensionel gelelektroforese normalt adskiller proteiner baseret på en enkelt egenskab, som proteinstørrelse.

Gelelektroforese er ofte er ofteBruges i forskning til separate molekyler ved at bruge det faktum, at mange biologiske molekyler, som DNA, har en elektrisk ladning.Denne kendsgerning kan bruges til fordel for forskere, fordi ladede molekyler kan adskilles efter størrelse gennem et porøst substrat som agarose ved at påføre en spændingsgradient på tværs af en porøs, ionisk gel.Over tid vil molekyler passere gennem denne gel mod den ladning, der er modsat molekylets naturlige ladning.Små molekyler og stærkt ladede molekyler bevæger sig begge hurtigere end store molekyler eller proteiner, der er svagt ladede.Ved 2D gelelektroforese, efter at have adskilt proteiner gennem en enkelt egenskab, der skaber en gradient, kan en gel derefter drejes sidelæns for at adskille de tidligere resulterende bånd baseret på en anden egenskab.

2D gelelektroforese anvender ofte molekylære ladninger af proteiner som enKarakteristisk, hvormed proteinaggregater kan opdeles i enkeltkomponentproteiner.Proteinmasse er en anden almindelig egenskab, der bruges til at adskille proteiner i 2D gelelektroforese.Efter at proteiner er kørt på en gel gennem en enkelt bane i en-dimensionel gelelektroforese, kan den gel derefter spindes i en centrifuge og trække de tungere proteiner ned hurtigere end de mindre, mindre massive proteiner.Trækretningen er vinkelret på den retning, som proteinerne blev trukket gennem gelen på grund af tiltrækning til en elektrisk ladning gennem en spændingsgradient.

Elektroforese har mange anvendelser i molekylære undersøgelser, herunder adskillelse af proteiner baseret på syntetiserede egenskaber som proteintagging.Proteinseparation baseret på en karakteristisk masse bruges også, når proteiner er mærket med andre molekyler.Denne teknik kan bruges med disse proteinkomplekser, fordi de mærket proteiner falder lettere gennem en gel end ikke -mærgede proteiner.

Mens mange separationsgeler i laboratorier er lavet af agarose, er proteinseparation ved 2D gelelektroforese bedst gjort på polyacrylamidgeler.Disse typer geler bruges i vestlige blots og andre proteinstørrelsesbaserede assays.Agarose bruges oftere til adskillelse af DNA -segmenter.