Hvad er en nordlig plet?

Northern blot -hybridisering er en teknik, der bruges til at detektere messenger -RNA (mRNA) niveauer i en prøve og til at kvantificere mængden af mRNA, der er til stede.Selvom der findes andre mere kraftfulde teknikker, forbliver Northern blot standarden på grund af dens enkelhed og brugervenlighed.Den nordlige blotting -teknik giver også mulighed for direkte sammenligning af flere prøver i et enkelt eksperiment.

Messenger RNA er en type nukleinsyre, der produceres, når der udtrykkes et gen.Et gen, der er tændt og funktionelt i en celle, transkriberes til mRNA.MRNA transporteres derefter ind i cytoplasmaet i cellen, hvor det oversættes til et protein.Northern blot -analyse af en cellulært mRNA -prøve kan derfor give nyttige oplysninger om den række proteiner, cellen producerer.

I en nordlig blot ekstraheres mRNA fra celler og løber gennem en denaturerende agarosegelelektroforese, som tillader mRNA i prøvenat blive adskilt i henhold til størrelse.Prøver af mRNA -molekyler i kendte størrelser køres på samme tid for at tilvejebringe en kontrol.Når elektroforese er afsluttet, overføres og immobiliseres prøverne på en fast membran, typisk fremstillet af et materiale, såsom nylon.Prøverne udsættes derefter for radiomærkede sonder i flere timer før analyse.Under analysen kan mRNA, der har hybridiseret til en radiomærket sonde, klart påvises ved hjælp af røntgenstråle.

Den nordlige blotting -teknik muliggør observation af genekspressionsmønstre mellem forskellige vævstyper.Messenger -RNA ekstraheret fra celler i forskellige forskellige væv og organtyper kan sammenlignes, og cellulære responser på stress, infektion og mange andre stimuli kan undersøges.Ved at se på forskelle i mRNA -ekspression under forskellige forhold kan en videnskabsmand bestemme, hvilke typer proteiner en celle producerer som respons på visse stimuli.Dette kan give ledetråde om funktioner af ukendte proteiner, eller i tilfælde af kendte proteiner, information om cellulære responser på de pågældende stimuli.

For eksempel kan en nordlig blot muligvis vise, at ekspressionen af et ukendt protein stiger som respons på tilstedeværelsen af et specifikt toksin.Det kunne derefter teoretiseres, at proteinet er involveret i at reducere toksicitet, måske ved at transportere kemikaliet ud af cellen eller omdanne det til en metabolit.Hvis kendte proteiner er under undersøgelse, kan det at dokumentere ændringer i proteinekspression give information om responsen selv.Hvis ekspression af en kendt molekylær transporter blev forøget, kunne det for eksempel bekræftes, at den cellulære respons på toksinet er at transportere toksinet ud af cellen.