Hvad er peptidoprensning?
Peptider er små polymerer sammensat af aminosyrer.Mange er biologisk aktive som hormoner, toksiner eller har andre evner.Sådanne forbindelser bruges ofte i biologisk, medicinsk og kemisk forskning.De tjener også som byggesten af proteiner, når antallet af dem er knyttet sammen.Peptidoprensning er en teknik, der bruges til entendifferentielt til en fysisk matrix.Højtryksvæskekromatografi (HPLC) anvendes ofte til peptidoprensning.Peptidet eller peptiderne påføres i en blanding af opløsningsmidler, der ændrer sig over tid, når de pumpes over en søjle med små perler ved højt tryk.Forskellige peptider elueres ved forskellige tidspunkter og detekteres af en skærm, ofte et UV -spektrofotometer.
Når man forsker på peptider, er ofte interesseindholdet sjældent og kan ikke købes fra kemiske virksomheder.Hvis strukturen af det ønskede peptid er kendt, er det ofte lettere at fremstille kemisk ved peptidsyntese end at isolere forbindelsen fra naturlige kilder.Isolering af naturlige produkter er notorisk vanskeligt.Syntetiske peptider oprenses generelt af HPLC.
En sådan kemisk syntese kan være skræmmende for en uafhængig forsker, der ikke er kemiker.Ofte kontraheres denne opgave med peptidsyntesefirmaer, der er specialiserede i disse teknikker.Dette kan være mere økonomisk end at prøve at opsætte systemet fra bunden af i et laboratorium.Peptidfirmaer kan fremstille brugerdefinerede peptider, der er skræddersyet til forskerens behov.
En anden grund til peptidoprensning kan være, når en forsker har oprenset et protein og forsøger at bestemme dets identitet.Han eller hun kan nedbryde proteinet til peptidfragmenter, adskille fragmenterne ved oprensning og have fragmenteringsmønsteret af peptiderne påvist ved et massespektrometer, når de elueres fra søjlen.Denne teknik er kendt som LC-MS, kort til væskekromatografimassespektrometri.Det giver molekylvægt og aminosyresammensætning af fragmenterne og muliggør ofte identifikation af proteiner, hvis lignende eller identiske er blevet identificeret tidligere.
Mange forskere arbejder med peptider, der har nye træk, såsom unaturlige aminosyrer, tilPrøv at finde dem med usædvanlige biologiske aktiviteter.Der er et helt felt kaldet peptidomimetik afsat til studiet af sådanne nye peptider.Ofte er computergenererede sekvenser designet, og et peptidbibliotek syntetiseres, der omfatter en række atypiske peptider.Peptidoprensning bruges til at adskille individuelle medlemmer af dette bibliotek for at tilvejebringe rent peptid til test for biologisk aktivitet.Denne strategi har haft succes med at generere mindst et nyt kommercielt tilgængeligt lægemiddel.
Mange af de biologisk aktive peptider er af interesse for medicinsk anvendelse.Forbindelser, der anvendes kommercielt, såsom insulin, produceres ofte af rekombinante DNA -overekspressionssystemer, der genererer store mængder af den ønskede forbindelse.Ofte er peptiderne genetisk konstrueret for at lette oprensning ved at have en slags tag tilsat til deres fronter.Dette gør det muligt for brugen af affinitetskromatografi til at rense peptidet.
Med denne type kromatografi er mærket en forbindelse, såsom histidin, der vil binde en matrix af perler, som nikkel, valgt for sin evne til at binde mærket.Uønskede proteiner og peptider passerer generelt gennem søjlen uden binding.Det specifikt designede peptid binder normalt stærkt til søjlen.Efter at de forurenende proteiner og peptider er blevet vasket af, elueres det ønskede peptid af en forbindelse, der konkurrerer om binding til THan matrix.Man har derefter en temmelig ren fremstilling af det ønskede peptid, og mærket kan fjernes ved spaltning.