Was ist Bisulfite -Sequenzierung?

Bisulfit -Sequenzierung ist eine Methode, bei der verschiedene Regionen der DNA unter Verwendung von Methylierung analysiert werden.Methylierung ist das Hinzufügen eines spezifischen Moleküls, der als Methylgruppe bezeichnet wird, zu einem Nukleotid, in diesem Fall normalerweise ein Zytosin.Inaktive Nukleotide werden häufig methyliert, sodass diese Methode für eine Vielzahl von Zwecken verwendet werden kann, von der Bestimmung aktiver Regionen eines Genoms bis hin zur Identifizierung von gen-reichen Regionen.Bei der Bisulfitsequenzierung werden methylierte Cytosine nicht durch den Sequenzierungsprozess beeinflusst, während nicht methylierte Cytosine in Uracil umgewandelt werden, ein Nukleotid, das normalerweise nicht im genetischen Material Desoxyribonukleinsäure (DNA.) Gefunden wird.

ist sehr empfindlich gegenüber Veränderungen in Veränderungen in Veränderungen inMethylierung, so kleine Änderungen der Bindung können Forscher spezifische Informationen über bestimmte Nukleotide liefern.Natriumbisulfit wandelt Cytosin in Uracil um, aber die Umwandlung erfolgt in einer Umgebung, in der methyliertes Cytosin diese Änderung nicht unterzogen wird.Wenn die Bisulfit -Sequenzierung abgeschlossen ist, wurde die ursprüngliche DNA in ein signifikant unterschiedliches Molekül umgewandelt.Cytosine werden stark erschöpft oder möglicherweise nicht vorhanden.Wenn in diesem konvertierten Molekül noch ein Cytosin gefunden wird, repräsentiert es ein natürlich methyliertes Cytosin im untersuchten Genom.Der bedeutendste Nachteil ist, dass es eine sehr hohe Salzkonzentration erfordert, um ordnungsgemäß zu arbeiten.Das Salz fördert das Glühen von einsträngiger DNA in seine natürlichere Doppelhelix, und das Natriumbisulfit kann immer Cytosine erreichen, wenn sie Teil der doppelsträngigen DNA sind.Wenn die Salzkonzentration zu hoch ist, kann eine Reihe von Cytosine möglicherweise nicht in Uracil umgewandelt werden, was zu einer falschen Identifizierung von methylierten Cytosine innerhalb eines Genoms führt.Denaturierende Wirkstoffe können erforderlich sein, um die Anzahl der falsch positiven Identifikationen zu minimieren.

Viele genomische Daten sind für die Bisulfit -Sequenzierung nicht erforderlich, sodass die Methode eine nützliche Anwendungsanalyse klinischer Proben hat.Die ursprüngliche Nukleinsäurequelle spielt keine Rolle, aber die Quelle muss DNA sein.Theoretisch könnte Ribonukleinsäure (RNA) unter Verwendung dieser Methode sequenziert werden, da die meisten RNAs einzeln gestrandet sind und aufgrund blockierter Nukleotide nicht so anfällig für falsch positive Ergebnisse sind.Bei der Inszenierung der Praxis ist die Bisulfit -Sequenzierung jedoch für RNA nicht nützlich, da RNA natürlich Uracil enthält.Ohne irgendeine Art von externer Markierung oder Ergänzung des Protokolls wären konvertierte Zytosine nicht von natürlichen Uracil zu unterscheiden.

Wenn eine Art von Sequenzierungsmethodik, Genauigkeit und Genauigkeit von wesentlicher Bedeutung sind, sind es wesentlich.Sensitive Methoden wie die Bisulfit -Sequenzierung bieten ein zuverlässiges Mittel zur Sequenzanalyse, was wiederum die Genanalyse und Identifizierung von Zielen für Arzneimittel und Therapien ermöglicht.Obwohl diese Methode nicht für lebende Menschen angewendet werden kann, kann sie immer noch bei den kleinsten Gewebeproben von großer Hilfe sein, mit denen man arbeiten kann.