Was ist ein elektrophoretischer Mobilitätsverschiebungstest?

Ein Assay ist ein Test, mit dem die Originalstücke von Zellen in Teile getrennt sind, die leicht zu identifizieren sind.Der elektrophoretische Mobilitätsverschiebungsassay ist ein Experiment, bei dem Elektrizität zur Bewegung von Makromolekülen wie Proteinen durch eine Gelmatrix verwendet wird, um eine Trennung zwischen den verschiedenen Makromolekülen basierend auf der Größe zu verursachen.Wie bei einer Autokatterie befinden sich die negativen und positiven Enden auf den gegenüberliegenden Seiten des elektrophoretischen Mobilitäts -Verschiebungsassays oder des Gelverschiebungsassays.Dies führt dazu, dass Strom die Makromoleküle basierend auf der Ladung anzieht.Jedes Makromolekül bewegt sich mit unterschiedlicher Geschwindigkeit, da kleinere weniger Störungen durch das Gel haben.

Es sind mehrere Schritte erforderlich, um einen elektrophoretischen Mobilitätsverschiebungsassay einzurichten.Die Makromoleküle, die getrennt werden müssen, müssen zuerst vorbereitet werden.Die meisten Makromoleküle werden aus lebenden Zellen erhalten und erfordern spezifische Verfahren.Das Erhalten der zu getrennten Teile erfordert häufig eine Zentrifuge und eine chemische Reaktion, die die Zellen abbricht.Die Zentrifuge wird ein Fläschchen mit hoher Geschwindigkeit drehen und ein Pellet der benötigten Makromoleküle bilden.Dies wird gelöst und oft wird eine Farbe oder ein anderes Etikett hinzugefügt, um den Gelschicht -Assay zu verfolgen.

Das Gel, manchmal das Bett genannt, muss auch frisch aus einer präzisen Mischung aus pulverisiertem Agarose und Wasser bestehen, das sich schnell von Flüssigkeit zu Gel dreht.In der Regel wird ein elektrophoretischer Mobilitätsverschiebungsassay mehrere Spuren für separate Assays haben, die zum Vergleich verschiedener makromolekulärer Gemische verwendet werden.Eine Spur ist immer als Kontrolle eingestellt und hat normalerweise nur eine Art von Makromolekül.

Die Stromquelle sollte sorgfältig ausgewählt werden und ist nicht angeschlossen, bis alles fertig ist.Die Zeitspanne, in der die Leistung angeht, bestimmt die Mobilitätsverschiebung der Makromoleküle.Es ist wichtig, die Stücke für die ordnungsgemäße Analyse zu trennen.Wenn die Macht nicht richtig zeitlich festgelegt ist, werden auch zukünftige Vergleiche ungenau sein.Die Richtung der Makromoleküle wird durch die Anklage bestimmt, die sie natürlich besitzen.Die meisten bewegen sich zum negativen Ende.

Einfache genetische Tests und Proteinanalysen werden üblicherweise mit einem elektrophoretischen Mobilitätsverschiebungsassay durchgeführt.Dies wird durch verschiedene Verschiebungen in verschiedenen Gassen angezeigt.Wenn eine Wechselwirkung auftritt, kombinieren und laufen die Makromoleküle langsamer durch die Matrix im Vergleich zur Kontrollspur mit nur einem Makromolekül.Gelverschiebungsassays werden verwendet, um genetische Ergebnisse schnell zu eliminieren oder zu bestätigen, dass komplizierte Methoden länger dauern können, bis sie abgeschlossen sind.Sie können auch bestimmen, ob Antikörper, ein Makromolekül im Immunsystem, an Proteinen haften, die zur Bekämpfung von Bakterien und Viren verwendet werden können.