Qu'est-ce que la détection ELISA?
Un test immuno-enzyme lié à l'enzyme (ELISA) est un test effectué dans un laboratoire d'immunologie pour déterminer les niveaux de protéines dans un échantillon biologique.La détection d'ELISA fait référence à la dernière étape du test dans lequel une solution claire, ou substrat, est ajoutée à une plaque en plastique contenant un anticorps marqué enzymatique lié.L'enzyme clive le substrat et un changement de couleur se produit.L'absorbance lumineuse de la solution colorée finale est ensuite mesurée sur un lecteur de plaque ELISA ou un spectrophotomètre.
Il existe différents types de tests ELISA, les deux étant les plus courants l'ELISA indirect et la capture ou le sandwich, ELISA.L'ELISA indirecte est utilisée pour détecter une protéine, connue sous le nom d'anticorps, dans le sérum d'un patient.Un exemple de test ELISA indirect est le test du virus de l'immunodéficience humaine (VIH) utilisé pour détecter les anticorps contre le VIH.Le test Sandwich ELISA détecte une protéine, ou antigène, en la capturant entre deux anticorps.La détection de l'hormone humaine chorionique humaine (HCG), qui est élevée pendant la grossesse, se fait avec un test ELISA sandwich.
Les deux tests ont une étape de détection ELISA à la fin du test.Cette étape implique l'ajout d'un anticorps qui a une molécule enzymatique qui y est attachée.Après l'ajout de l'anticorps marqué enzymatique, une solution incolore, contenant la molécule de substrat spécifique de cette enzyme, est ajoutée.L'enzyme clive la molécule du substrat et la solution change de couleur en fonction de la combinaison utilisée.La détermination de la quantité d'anticorps ou d'antigène dans l'échantillon de patient est effectuée en mesurant l'intensité du changement de couleur.
Il existe plusieurs combinaisons de substrats enzymatiques disponibles pour une utilisation à l'étape de détection ELISA.L'enzyme la plus courante est la peroxydase de raifort (HRP), qui peut cliver les molécules de substrat ortho-phénylènediamine dihydrochlorydride (OPD) et tétraméthylbenzidine (TMB), entre autres.Le clivage de l'OPD et du TMB entraîne une couleur jaune, et la densité optique ou l'absorbance de la lumière de ces substrats est mesurée par un lecteur de plaque ELISA.L'absorbance lumineuse de l'OPD est mesurée à une longueur d'onde de 490 nanomètres (nm) tandis que le TMB est mesuré à 450 nm.
Une autre enzyme commune utilisée dans l'étape de détection ELISA est la phosphatase alcaline.Cette enzyme est utilisée avec le substrat p-nitrophényl phosphate (PNPP), et produit également une solution jaune.PNPP absorbe la lumière à une longueur d'onde de 405 nm.
La sélection des combinaisons de substrats enzymatiques est généralement basée sur les anticorps marqués enzymatiques disponibles dans le commerce, ainsi que sur quel équipement sera utilisé pour mesurer l'absorbance lumineuse.Les nombreuses combinaisons disponibles pour la détection ELISA rendent le test ELISA très polyvalent.Il s'agit d'un outil important dans les laboratoires de tests et de recherche sur les maladies.