Quelle est la technique d'hybridation fluorescente in situ?
L'hybridation fluorescente in situ, également connue sous le nom d'hybridation de fluorescence in situ, est plus communément appelée poisson.Il s'agit d'une technique qui implique d'utiliser un court brin d'ADN marqué avec un colorant fluorescent pour détecter les anomalies génétiques.Le poisson permet aux chercheurs de visualiser les chromosomes, les parties des chromosomes ou les gènes spécifiques rapidement et avec précision.Ceci est souvent utilisé pour déterminer le pronostic et le traitement de certaines maladies, en particulier les cancers.
Le poisson est utilisé pour déterminer si les chromosomes ont des anomalies.Cela peut inclure des suppressions chromosomiques, des réarrangements ou des translocations, dans lesquels deux chromosomes ont changé de segments.Le poisson permet également aux chercheurs de visualiser des gènes spécifiques.Il peut déterminer si un certain gène est présent, où il est situé sur les chromosomes et si plusieurs copies sont présentes.C'est ce qu'on appelle la cartographie des gènes.
La composition génétique d'une personne est contenue dans son ADN, qui est situé dans les noyaux de toutes ses cellules.L'ADN a deux volets complémentaires l'un de l'autre.En d'autres termes, ils ont des molécules appelées paires de bases qui correspondent exactement ensemble.Les gènes sont des segments d'ADN qui ont une séquence particulière de paires de bases et sont situés sur des zones spécifiques de chromosomes.Les gènes sont hérités et déterminent le fonctionnement des cellules, mais ils peuvent également devenir mutés si la séquence de paires de bases d'ADN change.
La technique d'hybridation fluorescente in situ profite de la nature complémentaire des brins d'ADN.Les enquêteurs créent d'abord une sonde.Il s'agit d'un court brin d'ADN unique qui est complémentaire à la séquence génétique que recherche.La sonde est ensuite marquée ou attachée à un colorant fluorescent.
Les cellules des tissus malades, comme une biopsie tumorale, constituent généralement l'échantillon à examiner par les poissons.L'échantillon est chauffé pour dénaturer l'ADN dans les noyaux des cellules.Cela signifie que les doubles brins d'ADN dans les cellules de l'échantillon se séparent pour former des brins simples.Une sonde de poisson spécifique est ensuite hybride avec l'échantillon.En d'autres termes, le brin unique de la sonde est introduit et fusionne avec son seul brin gratuit dans les cellules d'échantillon dénaturées.
À l'aide d'un microscope fluorescent spécial, le chercheur examine l'échantillon.Si le gène ou le chromosome spécifique est présent dans les cellules de l'échantillon, il apparaîtra comme une lumière fluorescente sur un fond plus sombre.Les chercheurs peuvent facilement voir si le gène est présent ou non, et si c'est le cas, combien de copies du gène se trouvent dans chaque cellule.Si le chercheur recherche l'emplacement d'un gène, il peut voir où il se trouve sur le chromosome.Un microscope optique ordinaire ne peut pas être utilisé avec le poisson, car le colorant fluorescent dégage un très bas niveau de lumière.
L'utilisation de l'hybridation de l'ADN avec des sondes a d'abord été accomplie dans les années 1960;Cependant, les sondes ont été marquées avec des substances radioactives plutôt que des substances fluorescentes.Cela a eu plusieurs problèmes.Les substances radioactives sont intrinsèquement instables, dangereuses et nécessitent des protocoles spéciaux pour l'élimination.Il faut également beaucoup de temps pour mesurer le signal radioactif émis par la sonde hybride.La technique d'hybridation fluorescente in situ surmonte la plupart de ces obstacles.
Si les enquêteurs savent quel gène ils recherchent, le poisson est rapide et précis pour le trouver.Les poissons peuvent également être effectués même si les cellules ne se divisent pas activement, et elles fournissent des informations plus spécifiques sur les anomalies des chromosomes.Des techniques plus conventionnelles, telles que le karotypage, indiquent simplement aux chercheurs le nombre et la taille des chromosomes dans une cellule.
L'hybridation fluorescente in situ a des inconvénients.Étant donné que la clé du poisson est de connaître la séquence de la paire de bases et / ou l'emplacement d'un gène, il ne peut pas être utilisé comme outil de dépistage général.Il est également plus cher que les autres techniques moins spécifiques et peut ne pas être disponible dans tous les laboratoires ou hôpitaux./ p
Les avantages et les inconvénients de l'hybridation fluorescente in situ sont mieux décrits par l'exemple.Le poisson est systématiquement utilisé dans le diagnostic du cancer du sein pour déterminer si un patient a plusieurs copies d'un gène appelé HER2.Cela indique généralement une forme plus agressive de cancer du sein et que le patient devrait recevoir certains médicaments dans le cadre de son traitement.Le poisson peut être utilisé pour cela car la séquence de paires de bases et l'emplacement chromosomique du gène HER2 sont connus.En revanche, les poissons ne peuvent pas être utilisés pour déterminer quel gène ou gènes inconnu a provoqué le cancer du sein, ou pour dépister le cancer du sein en général.