Comment le niveau de phosphorylation est-il déterminé?

Le niveau de phosphorylation des molécules ou substances organiques est déterminé par deux méthodes: Western blot et spectrométrie de masse.La phosphorylation se réfère le plus souvent à l'attachement d'un phosphate aux protéines.Lorsque les phosphates s'attachent aux protiens, les processus naturels et les fonctions des enzymes protéiques dans le corps humain sont perturbés.La détermination du niveau de phosphorylation est cruciale pour traiter un large éventail de maladies, du cancer au diabète.

Western blot est une méthode populaire utilisée pour déterminer le niveau de phosphorylation d'un ensemble particulier de protéines.Les anticorps tels que les anticorps monoclonaux anti-phospho-tyrosine sont généralement utilisés car ils se lient facilement à des résidus de protéines tyrosine, qui sont affectés par la phosphorylation.Dans Western blot, les protéines sont d'abord séparées par la taille en utilisant une méthode de charge électrique connue sous le nom d'électrophorèse sur gel.

Les protéines sont ensuite transférées dans une membrane qui a été recouverte d'anticorps spéciaux qui se lient aux phosphates sur les protéines.Une fois les protéines transférées, les anticorps colleront à toutes les protéines avec un phosphate attaché.Le niveau de phosphorylation peut ensuite être déterminé par une radiographie de la membrane.Toutes les protéines affectées dégageront un éclair de lumière, ce qui facilite la mesure des niveaux de phosphorylation.

La spectrométrie de masse est une autre façon de mesurer le niveau de phosphorylation d'une substance.Ce processus convertit les molécules de protéines en ions, ce qui les rend plus faciles à suivre et à mesurer.L'échantillon est ionisé par une source d'ions puissante qui inonde l'échantillon avec des électrons.Cette action transforme l'échantillon en cations, ions chargés positivement.

L'analyseur de masse du spectromètre de masse sépare les ions par leur masse et leur intensité de charge.Cela permet au chercheur de découvrir le rapport masse / charge, qui est essentiel pour découvrir le niveau de phosphorylation de l'échantillon.Enfin, le détecteur mesure les ions dans l'ordre afin que les données puissent être affichées sous forme de graphique.Le graphique montre le rapport masse / charge des ions sur l'axe x et l'intensité relative des ions sur l'axe y.

Les niveaux de phosphorylation peuvent également être mesurés pendant la phosphorylation du substrat.La phosphorylation du substrat est un processus qui crée l'adénosine triphosphate (ATP), une molécule critique pour le transfert d'énergie entre les cellules, pendant la glycolyse.Ce processus se produit dans les cellules animales et les cellules végétales.

Dans les cellules végétales, les molécules d'ATP sont créées en utilisant l'énergie à partir du soleil.Cette énergie stimule la phosphorylation dans les chloroplastes des plantes, le site de la photosynthèse des plantes.Le niveau de phosphorylation est en corrélation avec la quantité de phosphate nécessaire pour créer des molécules ATP supplémentaires.