Qu'est-ce qu'un Northern Blot?

L'hybridation du Northern blot est une technique qui est utilisée pour détecter les niveaux d'ARN messager (ARNm) dans un échantillon, et pour quantifier la quantité d'ARNm qui est présente.Bien que d'autres techniques plus puissantes existent, Northern Blot reste la norme en raison de sa simplicité et de sa facilité d'utilisation.La technique du Northern Blot permet également une comparaison directe de plusieurs échantillons dans une seule expérience.

L'ARN messager est un type d'acide nucléique qui est produit lorsqu'un gène est exprimé.Un gène activé et fonctionnel dans une cellule est transcrit en ARNm.L'ARNm est ensuite transporté dans le cytoplasme de la cellule, où il est traduit en protéine.L'analyse par transfert nordique d'un échantillon d'ARNm cellulaire peut donc fournir des informations utiles sur le tableau des protéines que la cellule produit.

Dans une transmission du nord, l'ARNm est extrait des cellules et traversé une électrophorèse de gel d'agarose dénaturant, qui permet l'ARNm dans l'échantillonà séparer en fonction de la taille.Des échantillons de molécules d'ARNm de tailles connues sont effectuées en même temps pour fournir un contrôle.Une fois l'électrophorèse terminée, les échantillons sont transférés et immobilisés sur une membrane solide, généralement fabriqués à partir d'un matériau tel que le nylon.Les échantillons sont ensuite exposés à des sondes radiomarquées pendant plusieurs heures avant l'analyse.Au cours de l'analyse, l'ARNm qui s'est hybridé à une sonde radiomarquée peut être clairement détecté en utilisant des rayons X.

La technique de transfert du Nord permet d'observer les modèles d'expression génique entre différents types de tissus.L'ARN messager extrait des cellules de différents tissus et types d'organes peut être comparé, et les réponses cellulaires au stress, à l'infection et de nombreux autres stimuli peuvent être examinés.En examinant les différences d'expression de l'ARNm dans différentes conditions, un scientifique peut déterminer quels types de protéines qu'une cellule produit en réponse à certains stimuli.Cela peut fournir des indices sur les fonctions des protéines inconnues, ou dans le cas de protéines connues, des informations sur les réponses cellulaires aux stimuli en question.

Par exemple, un transfert nordique peut montrer que l'expression d'une protéine inconnue augmente en réponse à la présence d'une toxine spécifique.On pourrait alors théoriser que la protéine est impliquée dans la réduction de la toxicité, peut-être en transportant le produit chimique hors de la cellule ou en le convertissant en métabolite.Si les protéines connues sont à l'examen, la documentation des changements dans l'expression des protéines peut fournir des informations sur la réponse elle-même.Si l'expression d'un transporteur moléculaire connu était augmentée, par exemple, il pourrait être confirmé que la réponse cellulaire à la toxine est de transporter la toxine hors de la cellule.