Hoe werkt bacteriële endotoxine -testen?

Bacteriële endotoxine -testen omvat typisch het gebruik van reagentia die, wanneer gemengd in een oplossing met een mogelijke verontreiniging, een reactie veroorzaken, wat de aanwezigheid van een endotoxine aangaf.Chromogene testen, de gelstollingstest en turbidimetrische testen zijn de methoden die wetenschappers vaak gebruiken voor bacteriële endotoxinetests.Technici gebruiken deze evaluatiemethoden op verschillende stoffen en objecten bij het controleren op endotoxine -besmetting.Water, de grondstoffen die worden gebruikt bij het maken van medicijnen, apparatuur en verpakkingen moeten allemaal doorgaan met endotoxine -normen.

Bacteriën, schimmels en virussen hebben allemaal beschermende buitenmembranen bestaande uit lipopolysacchariden, ook wel LPS genoemd.Het lipidengedeelte van deze ketens bevat endotoxinen.Deze stoffen blijven over het algemeen in het membraan, maar worden vrijgegeven tijdens het proces van celdeling en tijdens cellulaire vernietiging of lysis.Bij mensen veroorzaken deze stoffen koorts, abnormale coagulatie, septische shock en andere symptomen, hoewel in tegenstelling tot exotoxinen in de cel, endotoxinen niet omzetten in een toxoïde.Over het algemeen controleren microbiologen op de aanwezigheid van endotoxinen geassocieerd met verschillende gram-negatieve bacteriën, waaronder e.coli .

De gelstollingstest, of limulus ameboecyte lysaat (LAL) -bepaling, omvat het gebruik van een membraan-vernietigende chemische stof die is afgeleid van de amoebocyten van de hoefijzerkrab, ook wel limulus polyfemus.of geleren treedt op wanneer het lysaat wordt blootgesteld aan het object of de substantie in kwestie.Microbiologen gebruiken typisch deze methode voor bacteriële endotoxine -testen in combinatie met chromogene en turbidimetrische testen voor overtuigende resultaten.

Chromogene bacteriële endotoxine -testen gebruiken een speciaal behandelde LAL.Wanneer dit lysaat contact maakt met een endotoxine, produceert de reactie een specifieke kleur.Het uiteindelijke testproces omvat het meten van de troebelheid of bewolking van de oplossing.Technici stellen de oplossing bloot die in de gelstolseltest wordt gevormd aan een spectrofotometer, die een lichtstraal uitzendt.Door het verlies van lichtintensiteit in de balk te meten terwijl deze door de oplossing gaat, kunnen microbiologen bepalen of een endotoxine aanwezig is.

Lab -medewerkers voltooien deze drie bacteriële endotoxinetests in het algemeen twee of drie keer om nauwkeurige resultaten te garanderen.De geltest wordt niet exclusief gebruikt, omdat de laagste detectielimiet 0,03 Ehrlich -eenheden per milliliter (EU/ml) is.Chromogene en turbidimetrische testen detecteren endotoxinen in het bereik van 0,005 EU/ml.Veiligheidsparameters verschillen sterk, afhankelijk van de geteste stof.Hoewel steriel water dat wordt gebruikt voor injectie- of irrigatiedoeleinden niet meer dan 0,25 EU/ml kan bevatten, kan steriel water voor inhalatiedoeleinden tot 0,5 EU/ml bevatten.