Wat is ELISA -detectie?

Een enzym verbonden immunosorbent -test (ELISA) is een test uitgevoerd in een immunologielaboratorium om niveaus van eiwit in een biologisch monster te bepalen.ELISA-detectie verwijst naar de laatste stap van de test waarin een duidelijke oplossing of substraat wordt toegevoegd aan een plastic plaat die gebonden enzym-gelabeld antilichaam bevat.Het enzym splitst het substraat en een kleurverandering treedt op.Licht absorptie van de uiteindelijke gekleurde oplossing wordt vervolgens gemeten op een ELISA -plaatlezer of spectrofotometer.

Er zijn verschillende soorten ELISA -tests, waarbij de twee meest voorkomende de indirecte ELISA en The Capture, of Sandwich, Elisa zijn.De indirecte ELISA wordt gebruikt om een eiwit, bekend als een antilichaam, in het serum van een patiënt te detecteren.Een voorbeeld van een indirecte ELISA -test is de menselijke immunodeficiëntievirus (HIV) -test die wordt gebruikt om antilichamen tegen HIV te detecteren.De Sandwich ELISA -test detecteert een eiwit of antigeen door het vast te leggen tussen twee antilichamen.Detectie van het hormoon humaan chorion -gonadotropine (HCG), dat tijdens de zwangerschap is verhoogd, wordt gedaan met een sandwich ELISA -test.

Beide tests hebben een ELISA -detectiestap aan het einde van de test.Deze stap omvat toevoeging van een antilichaam met een enzymmolecuul dat eraan is bevestigd.Na de toevoeging van het enzym-gelabelde antilichaam, wordt een kleurloze oplossing, die het substraatmolecuul bevat dat specifiek is voor dat enzym, toegevoegd.Het enzym splitst het substraatmolecuul en de oplossing verandert van kleur, afhankelijk van de gebruikte combinatie.Bepaling van de hoeveelheid antilichaam of antigeen in het patiëntenmonster wordt gedaan door de intensiteit van de kleurverandering te meten.

Er zijn verschillende enzymsubstraatcombinaties beschikbaar voor gebruik in de ELISA -detectiestap.Het meest voorkomende enzym is mierikswortelperoxidase (HRP), die de substraatmoleculen ortho-fenyleendiamine dihydrochloride (OPD) en tetramethylbenzidine (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB) (TMB), kunnen splitsen.Splitsing van zowel OPD- als TMB resulteert in een gele kleur, en de optische dichtheid of absorptie van het licht van deze substraten wordt gemeten door een ELISA -plaatlezer.De lichtabsorptie van OPD wordt gemeten bij een golflengte van 490 nanometer (NM), terwijl TMB wordt gemeten bij 450 nm.

Een ander gemeenschappelijk enzym dat wordt gebruikt in de ELISA -detectiestap is alkalische fosfatase.Dit enzym wordt gebruikt met het substraat p-nitrofenylfosfaat (PNPP) en produceert ook een gele oplossing.PNPP absorbeert licht bij een golflengte van 405 nm.

Selectie van de enzymsubstraatcombinaties is meestal gebaseerd op welke enzym-gelabelde antilichamen commercieel verkrijgbaar zijn, evenals welke apparatuur zal worden gebruikt om lichtabsorptie te meten.De vele beschikbare combinaties voor ELISA -detectie maken de ELISA -test zeer veelzijdig.Het is een belangrijk hulpmiddel bij het testen van ziekten en onderzoekslaboratoria.