Wat is de fluorescerende in situ hybridisatietechniek?
Fluorescerende in situ hybridisatie, ook bekend als fluorescentie in situ hybridisatie, wordt vaker vissen genoemd.Het is een techniek die het gebruik van een korte streng DNA met een fluorescerende kleurstof omvat om genetische afwijkingen te detecteren.Vis stelt onderzoekers in staat om chromosomen, delen van chromosomen of specifieke genen snel en nauwkeurig te visualiseren.Dit wordt vaak gebruikt om de prognose en behandeling voor bepaalde ziekten te bepalen, met name kankers.
Vissen worden gebruikt om te bepalen of chromosomen afwijkingen hebben.Dit kan chromosomale deleties, herschikkingen of translocaties omvatten, waarbij twee chromosomen van segmenten hebben geschakeld.Vis stelt onderzoekers ook in staat om specifieke genen te visualiseren.Het kan bepalen of een bepaald gen aanwezig is, waar het zich op de chromosomen bevindt en of er meerdere kopieën aanwezig zijn.Dit wordt genmapping genoemd.
De genetische samenstelling van een persoon zit in hun DNA, dat zich in de kernen van al hun cellen bevindt.DNA heeft twee strengen die complementair zijn aan elkaar.Met andere woorden, ze hebben moleculen die basenparen worden genoemd die precies overeenkomen.Genen zijn segmenten van DNA die een bepaalde reeks basenparen hebben en zich op specifieke gebieden van chromosomen bevinden.Genen worden geërfd en bepalen hoe cellen functioneren, maar ze kunnen ook gemuteerd worden als de sequentie van DNA -basen verandert.
De fluorescerende in situ hybridisatietechniek maakt gebruik van de gratis aard van DNA -strengen.Onderzoekers creëren eerst een sonde.Dit is een korte, enkele streng DNA die gratis is aan de genetische sequentie waarnaar de onderzoeker op zoek is.De sonde wordt vervolgens gelabeld of bevestigd aan een fluorescerende kleurstof.
Cellen van ziek weefsel, zoals een tumorbiopsie, vormen meestal het monster dat door vissen moet worden onderzocht.Het monster wordt verwarmd om het DNA in de kernen van de cellen te denatureren.Dit betekent dat de dubbele strengen DNA in de monstercellen uit elkaar breken om enkele strengen te vormen.Een specifieke vissonde wordt vervolgens gehybridiseerd met het monster.Met andere woorden, de enkele streng van de sonde wordt geïntroduceerd en combineert met zijn gratis enkele streng in de gedenatureerde monstercellen.
Met behulp van een speciale fluorescerende microscoop kijkt de onderzoeker naar het monster.Als het specifieke gen of chromosoom aanwezig is in de monstercellen, verschijnt het als een fluorescerend licht tegen een donkere achtergrond.Onderzoekers kunnen gemakkelijk zien of het gen aanwezig is of niet, en als het is, hoeveel kopieën van het gen zijn er in elke cel.Als de onderzoeker op zoek is naar de locatie van een gen, kan hij of zij zien waar het op het chromosoom is.Een gewone lichtmicroscoop kan niet worden gebruikt met vissen, omdat de fluorescerende kleurstof een zeer laag lichtniveau afgeeft.
Gebruik van DNA -hybridisatie met probes werd voor het eerst bereikt in de jaren zestig;De sondes werden echter gelabeld met radioactieve stoffen in plaats van fluorescerende.Dit had verschillende problemen.Radioactieve stoffen zijn inherent onstabiel, gevaarlijk en vereisen speciale protocollen voor verwijdering.Het duurt ook lang om het radioactieve signaal te meten dat wordt uitgestoten door de gehybridiseerde sonde.De fluorescerende in situ hybridisatietechniek overwint de meeste van deze obstakels.
Als onderzoekers weten welk gen ze op zoek zijn, is vissen snel en nauwkeurig in het vinden ervan.Vissen kunnen ook worden uitgevoerd, zelfs als cellen niet actief delen en het biedt meer specifieke informatie over afwijkingen in chromosomen.Meer conventionele technieken, zoals Karotyping, vertellen onderzoekers eenvoudigweg het aantal en de grootte van chromosomen in een cel.
Fluorescerende in situ hybridisatie heeft nadelen.Aangezien de sleutel tot vissen is om de basispaarsequentie en/of locatie van een gen te kennen, kan deze niet worden gebruikt als een algemeen screeningstool.Het is ook duurder dan andere, minder specifieke technieken en is mogelijk niet beschikbaar in alle laboratoria of ziekenhuizen./p
De voor- en nadelen van fluorescerende in situ hybridisatie kunnen het beste bij voorbeeld worden beschreven.Vis wordt routinematig gebruikt bij de diagnose van borstkanker om te bepalen of een patiënt meerdere kopieën heeft van een gen genaamd HER2.Dit duidt meestal op een agressievere vorm van borstkanker en dat de patiënt bepaalde medicijnen moet ontvangen als onderdeel van zijn behandeling.Vissen kunnen hiervoor worden gebruikt omdat de basispaarsequentie en de chromosomale locatie van het HER2 -gen bekend zijn.Vissen daarentegen kunnen niet worden gebruikt om te bepalen wat onbekende gen of genen de borstkanker hebben veroorzaakt, of in het algemeen screenen op borstkanker.