Wat zijn plasmiden?

Binnen veel verschillende bacteriën kunnen kleine cirkelvormige DNA worden gevonden in het cytoplasma.Deze DNA -cirkels staan bekend als plasmiden en ze staan los van het chromosomale DNA, of het DNA dat de genen voor de bacteriecellen draagt.Verschillende kopieën van de plasmiden zijn vaak aanwezig in de bacteriecel.Plasmiden spelen een zeer belangrijke rol in genetische manipulatie, met name bij het klonen van genen.

Wanneer genen worden gekloond, vindt het proces meestal plaats in bacteriën.Om het gen te krijgen dat in de bacteriën moet worden gekloneerd, is een vector noodzakelijk.Een plasmide is wat wordt gebruikt als de vector, omdat het gemakkelijk van de ene cel naar de andere kan doorgeven.

Er zijn een aantal stappen die betrokken zijn bij genklonen voordat een plasmide in een gastheercel wordt geplaatst.Ten eerste moet het genen dat moet worden gekopieerd, geïsoleerd worden, evenals de plasmiden die als vectoren moeten worden gebruikt.Zodra dit is gebeurd, moet het gen in het plasmide -DNA worden ingevoegd.Het plasmide wordt vervolgens in de bacteriële gastheercel ingebracht voor replicatie.

Om plasmiden van bacteriecellen te isoleren, moeten de cellen aanvankelijk worden behandeld met enzymen om de celwanden van de bacteriën af te breken.Het grotere chromosomale DNA is het gescheiden van de kleinere plasmiden met behulp van een centrifuge.Het geïsoleerde plasmide-DNA is nu klaar om het gen erin te laten inbrengen.

plasmiden bestaan uit een dubbelstrengige cirkel van DNA.Om het gewenste gen in te voegen, wordt het plasmide -DNA gesneden met restrictie -enzymen.Deze enzymen snijden alleen DNA bij zeer specifieke nucleotidesequenties.Zodra het plasmide -DNA is gesneden, worden linkersequenties toegevoegd aan de losse eindjes die correleren met de uiteinden van het te ingebrachte gen.Dit zorgt ervoor dat het gen precies in het plasmide past.

Zodra het gen in het plasmide is ingebracht, is het nu klaar om in een levende bacterie te worden ingebracht.Bacteriën repliceren hun plasmiden zodat een enkele cel veel kopieën kan bevatten.Er kunnen maximaal 200 kopieën van een enkel plasmide binnen één bacterie zijn.Als het plasmide in veel bacteriecellen wordt geïntroduceerd, kunnen veel kopieën van het gen relatief snel worden geproduceerd, vooral omdat bacteriecellen om de 20 minuten repliceren.

Dit is het proces dat wordt gebruikt om menselijke insuline te creëren.Het gen dat codering voor insuline werd geïsoleerd en in een plasmide ingebracht.Alle plasmiden die het insulinegen bevatten, werden vervolgens in een bacterie geïntroduceerd, waar ze werden gerepliceerd.De bacteriën bleven vervolgens zichzelf repliceren, zodat vele miljoenen cellen die het insulinegen bevatten in zeer korte tijd kunnen worden gecreëerd.Dit gekloonde gen biedt nu een betrouwbare bron voor menselijke insuline.