Wat is een Northern -blot?

Northern -blothybridisatie is een techniek die wordt gebruikt om messenger RNA (mRNA) -niveaus in een monster te detecteren en om de hoeveelheid mRNA die aanwezig is te kwantificeren.Hoewel er andere krachtigere technieken bestaan, blijft Northern -blot de standaard vanwege de eenvoud en het gebruiksgemak.De Northern -blottingstechniek maakt ook een directe vergelijking van meerdere monsters mogelijk in een enkel experiment.

Messenger RNA is een type nucleïnezuur dat wordt geproduceerd wanneer een gen tot expressie wordt gebracht.Een gen dat is ingeschakeld en functioneel in een cel wordt getranscribeerd in mRNA.Het mRNA wordt vervolgens in het cytoplasma van de cel getransporteerd, waar het wordt vertaald in een eiwit.Northern -blotanalyse van een cellulair mRNA -monster kan daarom nuttige informatie verschaffen over de reeks eiwitten die de cel produceert.

In een noordelijk blot wordt mRNA geëxtraheerd uit cellen en door een denaturerende agarosegelelektroforese geëxtraheerd, waardoor mRNA in het monster mogelijk iste gescheiden worden volgens de grootte.Monsters van mRNA -moleculen van bekende afmetingen worden tegelijkertijd uitgevoerd om een controle te geven.Zodra de elektroforese is voltooid, worden de monsters overgebracht en geïmmobiliseerd op een vast membraan, meestal gemaakt van een materiaal zoals nylon.De monsters worden vervolgens enkele uren vóór analyse blootgesteld aan radioactief gelabelde sondes.Tijdens de analyse kan mRNA dat is gehybridiseerd met een radioactief gelabelde sonde duidelijk worden gedetecteerd met behulp van röntgenfoto's.

De Northern -blottingstechniek maakt de observatie van genexpressiepatronen tussen verschillende weefseltypen mogelijk.Messenger RNA geëxtraheerd uit cellen van verschillende weefsels en orgaantypen kunnen worden vergeleken, en cellulaire reacties op stress, infectie en vele andere stimuli kunnen worden onderzocht.Door te kijken naar verschillen in mRNA -expressie onder verschillende omstandigheden, kan een wetenschapper bepalen welke soorten eiwitten een cel produceert in reactie op bepaalde stimuli.Dit kan aanwijzingen geven over functies van onbekende eiwitten, of in het geval van bekende eiwitten, informatie over cellulaire reacties op de stimuli in kwestie.

Een Northern -blot kan bijvoorbeeld aantonen dat de expressie van een onbekend eiwit toeneemt als reactie op de aanwezigheid van een specifiek toxine.Het kan dan worden theoretiseerd dat het eiwit betrokken is bij het verminderen van de toxiciteit, misschien door de chemische stof uit de cel te transporteren of in een metaboliet om te zetten.Als bekende eiwitten worden onderzocht, kan het documenteren van veranderingen in eiwitexpressie informatie verstrekken over de reactie zelf.Als expressie van een bekende moleculaire transporter bijvoorbeeld werd verhoogd, zou kunnen worden bevestigd dat de cellulaire respons op het toxine de toxine uit de cel is.