Wat is het iso -elektrische punt?

Eiwitten zijn gebouwd van ketens van aminozuren, die elk verschillende pH -waarden hebben.De totale pH van het eiwit bestaat uit het mengsel van de pH -waarden van de afzonderlijke aminozuren terwijl ze ionen vormen in de specifieke oplossing waarin ze worden opgelost.Het iso -elektrische punt (PI) van een eiwit is de pH waarbij dat eiwit geen netto lading heeft.Deze eigenschap kan worden benut om het eiwit te scheiden met de bekende PI van andere eiwitten in een heterogeen mengsel.

Aminozuren hebben een amino -terminalgroep die eenvoudig is, met een hoge pH.Het andere uiteinde van het aminozuur is de carboxylterminal die zuur is, met een lage pH.Bij verschillende pH -waarden zullen de aminozuren op de eiwitten variëren in hun ladingen.Eiwitten onder hun iso -elektrisch punt hebben een positieve lading.Die boven dit punt hebben daarentegen een negatieve lading.

Om kennis te benutten van het iso -elektrische punt voor eiwitzuivering, wordt een mengsel van eiwitten onderworpen aan een elektrisch veld.Dit wordt vaak gedaan in agarose- of polyacrylamidegels en staat bekend als iso -elektrische focus.Een oudere techniek is om de procedure op grotere schaal in een glazen kolom uit te voeren met behulp van een oplossing van sucrose met elektroden aan elk uiteinde.Verbindingen genaamd Ampholytes worden toegevoegd die de vorming van een consistente pH -gradiënt veroorzaken.Wanneer de gel of kolom wordt onderworpen aan de elektrische stroom, migreren de eiwitten totdat ze hun iso -elektrische punt bereiken en dan stationair blijven.

Eiwitten op gels worden in het algemeen zichtbaar gemaakt door een kleurstof die eiwitten bindt.Soms, als enzymen worden bestudeerd, kan een substraat worden gebruikt dat een gekleurde reactie geeft.Gewoonlijk worden normen gebruikt die eiwitten hebben van bekende iso -elektrische punten.

Zodra men weet waar het gewenste eiwit zich bevindt, is een veel voorkomende techniek om het geïsoleerde eiwit uit de gel te snijden.Het eiwit kan vervolgens worden gezuiverd en gesequenced.Zodra de sequentie bekend is, kan deze worden gebruikt om primers te ontwerpen voor de polymerasekettingreactie (PCR) en gebruikt om het gen voor het eiwit te klonen als geschikt nucleïnezuurmateriaal beschikbaar is.

ISOElectric Focusing is ook een veel voorkomende manier om nauw te analyserenGerelateerde eiwitten om te zien hoe verschillend ze van elkaar zijn.Een complicatie kan zijn dat eiwitten aan hen kunnen worden gebonden.Dit wordt glycosylering genoemd en kan de PI van het eiwit beïnvloeden.Het lijkt erop dat er meerdere eiwitten zijn met verschillende iso -elektrische punten, terwijl er in feite slechts één eiwit is dat differentieel geglycosyleerd is.Eiwitten gezuiverd door standaardmethoden zoals chromatografie worden soms geanalyseerd door iso -elektrische focus om hun zuiverheid te waarborgen.