Hvordan fungerer bakteriell endotoksintesting?

Bakteriell endotoksintesting involverer typisk bruk av reagenser som, når den blandes i en løsning med en mulig forurensning, forårsaker en reaksjon, og signaliserer tilstedeværelsen av et endotoksin.Kromogen testing, gelpropptesten og turbidimetrisk testing er metodene forskere som ofte bruker for bakteriell endotoksintesting.Teknikere bruker disse evalueringsmetodene på en rekke stoffer og gjenstander når du sjekker for endotoksinforurensning.Vann, råvarene som brukes til å lage medisiner, utstyr og emballasje, må alle passere endotoksinstandarder.

Bakterier, sopp og virus har alle beskyttende utvendige membraner bestående av lipopolysakkarider, også referert til som LPS.Lipiddelen av disse kjedene inneholder endotoksiner.Disse stoffene holder seg generelt innenfor membranen, men frigjøres under prosessen med celledeling og under cellulær ødeleggelse eller lysis.Hos mennesker forårsaker disse stoffene feber, unormal koagulasjon, septisk sjokk og andre symptomer, selv om i motsetning til eksotoksiner i cellen, konverteres ikke endotoksiner til et toksoid.Generelt sjekker mikrobiologer for tilstedeværelsen av endotoksiner assosiert med forskjellige gramnegative bakterier, inkludert E.coli .

Gelpropptesten, eller Limulus ameboecyte-lysat (LAL) -analyse, innebærer å bruke en membran-ødeleggende kjemikalie avledet fra amoebocyttene til hestesko-krabben, også referert til som limulus-polyfemus.eller gelering oppstår når lysatet blir utsatt for det aktuelle objektet eller stoffet.Mikrobiologer bruker typisk denne metoden for bakteriell endotoksintesting i forbindelse med kromogen og turbidimetrisk testing for avgjørende resultater.

Kromogen bakteriell endotoksintesting bruker en spesialbehandlet LAL.Når dette lysatet kontakter et endotoksin, produserer reaksjonen en spesifikk farge.Den endelige testprosessen inkluderer å måle turbiditeten eller uklarheten i løsningen.Teknikere utsetter løsningen som er dannet i gelpropptesten til et spektrofotometer, som avgir en lysstråle.Ved å måle tapet av lysintensitet i bjelken når den passerer gjennom løsningen, kan mikrobiologer bestemme om et endotoksin er til stede eller ikke.

Lab -medarbeidere fullfører generelt disse tre bakterielle endotoksintestene to eller tre ganger for å sikre nøyaktige resultater.Gel -testen brukes ikke utelukkende ettersom den laveste deteksjonsgrensen er 0,03 ehrlich -enheter per milliliter (EU/ml).Kromogen og turbidimetrisk testing oppdager endotoksiner i 0,005 EU/ml -området.Sikkerhetsparametere er veldig forskjellige avhengig av stoffet som testes.Mens sterilt vann brukt til injeksjon eller vanningsformål ikke kan inneholde mer enn 0,25 EU/ml, kan sterilt vann for inhalasjonsformål inneholde opptil 0,5 EU/ml.