Hva er et biotinantistoff?

I motsetning til hva man først kan tro, er et biotinantistoff ikke et stoff som blir reist mot biotin.Snarere er et biotinantistoff et antistoff som har blitt konjugert til biotin.Biotin binder sterkt til en ligand mdash;Avidin Mdash;som på sin side kan konjugeres til lysdetekterbare molekyler som fluoroforer.Biotin og avidin danner en av de sterkeste biologisk relevante kovalente bindinger som er kjent, noe som gjør biotin- og avidin-konjugerte ligand/reseptorenheter spesielt nyttige i vitenskapelige studier.

Biotin er et B-kompleks vitamin mdash;Vitamin B7.Det er et så lite molekyl at flere biotinmolekyler kan konjugeres til et enkelt monoklonalt eller polyklonalt antistoff.At biotin også er vannløselig, gir større allsidighet i buffersystemer enn om det var uoppløselig.For større spesifisitet anbefales ofte monoklonalt antistoffkonjugasjon til biotin over polyklonalt antistoffkonjugering.Biotinmolekylet kan være direkte bundet med antistoffet av interesse, eller det kan kobles gjennom en molekylær hale for å gi mer bevegelsesfrihet.

Biotinliganden avidin finnes i eggalbumin.Det kan være billig laget og lett isolert.Flere avidinmolekyler vil binde seg til hver biotinreseptor, og forsterker et enkelt antistoffdeteksjonssignal.Når et biotinantistoff fester seg til et antigen av interesse, kan en eksperimentør deretter utsette komplekset for avidin konjugert til fluoroforer, noe som gjør komplekset påviselig.Gjennom fluorescerende avbildning kan biotinantistoffet og avidin-konjugert ligand påvises med lysmikroskopi, og antigener av interesse kan studeres in situ .Vanlig løsning for antigendeteksjon, det eksisterer alternativer som fremdeles benytter seg av biotin/avidin -komplekset.Å binde biotin til en ligand som et nevrotoksin kan være fordelaktig når det gjelder å oppdage plassering av neuronale reseptorer som er påvirket av det aktuelle nevrotoksinet.Det er også mulig å konjugere biotin til en nukleotidsekvens som messenger ribonukleinsyre (mRNA) for å finne hvor disse nukleotidsekvensene blir oversatt til proteiner eller å oppdage cellulær mRNA -regulering.

Det er mulig å kjøpe biotinylert polyklonal eller monoklonalt antistoffer,Selv om biotinylert antistoffproduksjon er innenfor muligheten til mange eksperimenter.Protokoller kan bli funnet på nettet som antyder antistoffbiotinyleringsmetoder, selv om de mest lett fulgte protokoller direkte koble biotin til et antistoff i stedet for å antyde hvordan man interkalerer et molekylært avstand.Molekylære avstandsstykker mellom biotin og det tilhørende antistoffet gir større avstand for å eksponere flere molekyler for bindingsseter, og disse biotinantistoffene er vanligvis kjøpt i stedet for laget.