Hva er en ubiquitineringsanalyse?

Ubiquitination refererer til binding av protein ubiquitin til andre proteiner av tre forskjellige enzymer.En ubiquitineringsanalyse er en test som bestemmer hvor mye av denne prosessen som skjer i cellen.Tester kan brukes for å bestemme hvordan forskjellige forhold påvirker proteinbinding, trinn og strukturer som er viktige i ubiquitinnasjonsveien, og mengden protein i cellen.Mangelfulle eller overabundante mengder har vært knyttet til utviklingen av mange forskjellige sykdommer.

Et protein funnet i celler, funksjonen til ubiquitin er å binde seg til proteiner mens du fungerer som en tag eller signal til andre strukturer.Denne taggen signaliserer deretter enzymer for å vite at proteinet kan ødelegges, resirkuleres eller flyttes.Resultatet er ødeleggelse eller transport av proteiner.

Disse taggingproteinene er viktige for DNA -reparasjon, virusinfeksjoner og immunrespons.Andre viktige funksjoner inkluderer roller i celledød, cellulær inndeling og utvikling av celler.For mye ubiquitin, eller mangel på dem, kan spille en rolle i dannelsen av mange sykdommer, som kreft, genetiske lidelser og sykdommer i immunforsvaret.

Forskere vil bruke en ubiquitineringsanalyse for å prøve å bestemme hvilke forhold som endrer konsentrasjonen av proteinet i cellen og sammenligner syke celler med sunne celler.Forskere bruker det også for å undersøke hvilke forhold som vil forårsake endringer i binding.I tillegg kan de prøve å koble spesifikk DNA -kode med mengden enzymer i cellen.

Det er mer enn en type ubiquitineringsanalyse som forskningsforskere spesifikt bruker.Den ene vil avgjøre prosentandelen av proteiner som er bundet med ubiquintin.En annen undersøker aktiviteten til enzymer eller tilstedeværelsen av andre mellomprodukter som finnes i allestedsnærværende vei.Ulike analyser er utviklet basert på målproteinet som ubiquitin vil binde seg til.

Grunnlaget for en ubiquitineringsanalyse er å inkorporere en forbindelse som er merket ved bruk av et annet lett målt kjemikalie.I onkologiske analyser kan ubiquitin merkes med kryptat, en forbindelse som inneholder to nitrogenatomer.Dette kan brukes til å bestemme hvilket enzym som er mest aktivt i cellen.

En ubiquitineringsanalyse vil ha to trinn.Den første er et enzymatisk trinn der enzymer vil binde det merkede ubiquitin til målproteinet.Det andre er et deteksjonstrinn der binding av målproteinet blir undersøkt ved bruk av et konjugat som et antistoff.Antistoffet vil fluoresce, eller endre farge, som deretter lar forskeren bestemme aktiviteten til enzymer.