Hva er ELISA -deteksjon?

Et enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) er en test utført i et immunologilaboratorium for å bestemme nivåer av protein i en biologisk prøve.ELISA-deteksjon refererer til det siste trinnet i testen der en klar løsning, eller underlag, tilsettes en plastplate som inneholder bundet enzymmerket antistoff.Enzymet spalter underlaget og en fargeendring oppstår.Lysabsorbans av den endelige fargede løsningen måles deretter på en ELISA -plateleser eller spektrofotometer.

Det er forskjellige typer ELISA -tester, med de to vanligste er den indirekte Elisa og fangsten, eller sandwich, ELISA.Den indirekte ELISA brukes til å oppdage et protein, kjent som et antistoff, i pasientens serum.Et eksempel på en indirekte ELISA -test er humanimmunsviktvirus (HIV) -test som brukes til å oppdage antistoffer mot HIV.Sandwich ELISA -testen oppdager et protein, eller antigen, ved å fange det mellom to antistoffer.Påvisning av det hormonet humant korionisk gonadotropin (HCG), som er forhøyet under graviditet, gjøres med en sandwich ELISA -test.

Begge testene har et ELISA -deteksjonstrinn ved slutten av analysen.Dette trinnet innebærer tilsetning av et antistoff som har et enzymmolekyl festet til det.Etter tilsetning av det enzymmerkede antistoffet, blir en fargeløs løsning, som inneholder underlagsmolekylet som er spesifikt for det enzymet, tilsatt.Enzymet spalter underlagsmolekylet og løsningen endrer farge avhengig av kombinasjonen som brukes.Bestemmelse av mengden antistoff eller antigen i pasientprøven gjøres ved å måle intensiteten til fargeendringen.

Det er flere enzymsubstratkombinasjoner tilgjengelig for bruk i ELISA -deteksjonstrinnet.Det vanligste enzymet er pepperrotperoksidase (HRP), som kan spalte substratmolekyler orto-fenylendiamindihydroklorid (OPD) og tetrametylbenzidin (TMB), blant andre.Spaltning av både OPD og TMB resulterer i en gul farge, og den optiske tettheten eller absorbansen til disse underlagene måles av en ELISA -plateleser.Lysabsorbansen til OPD måles med en bølgelengde på 490 nanometer (NM) mens TMB måles ved 450 nm.

Et annet vanlig enzym brukt i ELISA -deteksjonstrinnet er alkalisk fosfatase.Dette enzymet brukes med underlaget P-nitrofenylfosfat (PNPP), og produserer også en gul løsning.PNPP absorberer lys ved en bølgelengde på 405 nm.

Valg av enzymsubstratkombinasjoner er vanligvis basert på hvilke enzymmerkede antistoffer som er kommersielt tilgjengelige, samt hvilket utstyr som skal brukes til å måle lysabsorbans.De mange kombinasjonene som er tilgjengelige for ELISA -deteksjon gjør ELISA -testen svært allsidig.Det er et viktig verktøy i sykdomstesting og forskningslaboratorier.