Hva er ELISA -protokoll?

En enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) er en vanlig test brukt i immunologi for å oppdage antigener eller antistoffer.Antigener provoserer en immunsystemreaksjon mdash;Med andre ord, de forårsaker sykdommer.ELISA brukes til å oppdage mange bakterielle og virale antigener, inkludert humant immunsviktvirus (HIV), malaria, kolera, meslinger og kusma.En litt annen ELISA -protokoll kan brukes til å oppdage antistoffer mot disse og mange andre patogener.En ELISA-protokoll er trinn-for-trinnprosedyren for å utføre en spesifikk ELISA.

Selv om ELISA-protokollen varierer litt, avhengig av typen ELISA som utføres, er det grunnleggende konseptet det samme for dem alle.ELISA avhenger av enzymbundne antistoffer, også kalt antiglobuliner .Et signalmolekyl festet til disse antiglobulinene forårsaker et underlag tilsatt under analysen for å endre farge, hvis ønsket antigen eller antistoff er til stede.Mengden antigen eller antistoff til stede er proporsjonal med mengden fargeendring, som kan måles med en elektronisk plateleser.

Det er tre hovedtyper ELISA.En direkte ELISA brukes vanligvis til å oppdage antigener i stedet for antistoffer.Dette er den enkleste ELISA-protokollen, ettersom det enzymbundne antistoffet binder seg direkte til ønsket antigen.Substrat tilsettes deretter for å bestemme mengden av antigen til stede.

En indirekte ELISA brukes til å oppdage antistoffer, mens en annen type indirekte elisa mdash;kalt en sandwich elisa mdash;kan brukes til å oppdage antigener.En sandwich ELISA -protokoll krever to antistoffer, kalt fangst- og deteksjonsantistoffer, for å binde seg til ønsket antigen.Et antiglobulin tilsettes, som binder seg til deteksjonsantistoffet, og underlaget tilsettes.Den indirekte ELISA følger en lignende protokoll, men bruker et fangstantigen i stedet for et fangstantistoff for å oppdage ønsket antistoff.

Konkurransedyktig ELISA brukes ofte til å oppdage antigener som er til stede i lave konsentrasjoner, fordi det er en veldigsensitiv analyse.I motsetning til de andre ELISA-protokollene, bruker konkurrerende ELISA et enzymbundet antigen i stedet for et antistoff, og en litt annen kvantifiseringsmetode.I den blir prøven som inneholder antigenet som skal påvist og det enzymbundne antigenet begge tilsettes et antistoff, og de to antigenene konkurrerer om antistoffbindende steder.Når underlaget tilsettes, er fargeendringen større, med et høyere forhold mellom bundne enzymbundne antigener for å binde prøveantigener.Dette betyr at endring av høyere farge oppdages ved lavere konsentrasjoner av prøveantigenet, og det er det som gjør denne metoden så følsom.