Hva er 2D gelelektroforese?

To-dimensjonal (2D) gelelektroforese er en metode forskere bruker for å ta fra hverandre og analysere proteinblandinger ved først å skille bånd av proteiner langs to forskjellige akser.Det er en teknikk som ofte brukes når du arbeider med kompliserte eller tykke blandinger av proteiner, ofte med overlappende størrelser av proteiner.2D gelelektroforese skillerBrukes i forskning for å skille molekyler ved å benytte seg av det faktum at mange biologiske molekyler, som DNA, har en elektrisk ladning.Dette faktum kan brukes til fordel for forskere fordi ladede molekyler kan skilles med størrelse gjennom et porøst underlag som agarose ved å påføre en spenningsgradient over en porøs, ionisk gel.Over tid vil molekyler passere gjennom denne gelen, mot ladningen som er motsatt av molekylets naturlige ladning.Små molekyler og sterkt ladede molekyler beveger seg begge raskere enn store molekyler eller proteiner som er svakt ladet.I 2D gelelektroforese, etter å ha skilt proteiner gjennom en enkelt egenskap, som skaper en gradient, kan en gel deretter dreies sidelengs for å skille de tidligere resulterende båndene basert på en annen egenskap.

2D gelelektroforese bruker ofte molekylære ladninger av proteiner som enKarakteristikk som proteinaggregater kan skilles inn i enkeltkomponentproteiner.Proteinmasse er en annen vanlig egenskap som brukes til å skille proteiner i 2D gelelektroforese.Etter at proteiner kjøres på en gel gjennom en enkelt bane i endimensjonal gelelektroforese, kan den gelen deretter spunnet i en sentrifuge, og trekker de tyngre proteinene ned raskere enn de mindre, mindre massive proteiner.Retningen på trekket er vinkelrett på retningen proteiner ble trukket gjennom gelen på grunn av tiltrekning til en elektrisk ladning gjennom en spenningsgradient.

Elektroforese har mange bruksområder i molekylære studier, inkludert separasjon av proteiner basert på syntetiserte egenskaper, som proteinMerking.Proteinseparasjon basert på en karakteristisk masse brukes også når proteiner blir merket med andre molekyler.Denne teknikken kan brukes med disse proteinkompleksene fordi de merkede proteinene vil falle lettere gjennom en gel enn ikke -taggede proteiner.

Mens mange separasjonsgeler i laboratorier er laget av agarose, er proteinkeparasjon ved 2D -gelelektroforese best gjort på polyakrylamidgeler.Denne typen geler brukes i Western Blots og andre proteinstørrelsesbaserte analyser.Agarose brukes oftere for separasjon av DNA -segmenter.