Hva er peptidrensing?

Peptider er små polymerer sammensatt av aminosyrer.Mange er biologisk aktive som hormoner, giftstoffer eller har andre evner.Slike forbindelser brukes ofte i biologisk, medisinsk og kjemisk forskning.De fungerer også som byggesteinene til proteiner når antall av dem er koblet sammen.Peptidrensing er en teknikk som brukes til å enten rense store mengder av et ønsket peptid, eller for å bidra til å skille peptider generert fra fordøyelsen av proteiner.

Rensing av peptider oppnås ved å bruke en teknikk for kromatografi, en måte å skille forbindelser som binderforskjellig til en fysisk matrise.Væskekromatografi med høyt trykk (HPLC) brukes ofte til peptidrensing.Peptidet eller peptidene påføres i en blanding av løsningsmidler som endres over tid når de pumpes over en kolonne med små perler ved høyt trykk.Ulike peptider eluerer ved forskjellige tidspunkter og blir oppdaget med en skjerm, ofte et UV -spektrofotometer.

Når du forsker på peptider, er ofte stoffet av interesse sjelden og kan ikke kjøpes fra kjemiske selskaper.Hvis strukturen til det ønskede peptidet er kjent, er det ofte lettere å fremstille kjemisk ved peptidsyntese enn å isolere forbindelsen fra naturlige kilder.Isolering av naturlige produkter er notorisk vanskelig.Syntetiske peptider blir generelt renset ved HPLC.

Slik kjemisk syntese kan være skremmende for en uavhengig forsker som ikke er en kjemiker.Ofte blir denne oppgaven kontrahert til peptidsyntese selskaper som spesialiserer seg på disse teknikkene.Dette kan være mer økonomisk enn å prøve å sette opp systemet fra bunnen av i et laboratorium.Peptidselskaper kan gjøre tilpassede peptider tilpasset forskerens behov.

En annen grunn til peptidrensing kan være når en forsker har renset et protein og prøver å bestemme identiteten.Han eller hun kan nedbryte proteinet til peptidfragmenter, skille fragmentene ved rensing og ha fragmenteringsmønsteret til peptidene som ble påvist med et massespektrometer når de eluerer fra kolonnen.Denne teknikken er kjent som LC-MS, forkortelse for væskekromatografimasse-spektrometri.Det gir molekylvekt og aminosyresammensetning av fragmentene, og muliggjør ofte identifisering av proteiner, hvis lignende eller identiske er blitt identifisert tidligere.

Mange forskere jobber med peptider som har nye funksjoner, for eksempel unaturlige aminosyrer, tilPrøv å finne de med uvanlige biologiske aktiviteter.Det er et helt felt som kalles peptidomimetikk som er viet til studiet av slike nye peptider.Ofte er datamaskingenererte sekvenser designet, og et peptidbibliotek syntetiseres som omfatter en rekke atypiske peptider.Peptidrensing brukes til å skille individuelle medlemmer av dette biblioteket for å gi rent peptid å teste for biologisk aktivitet.Denne strategien har vært vellykket med å generere minst ett nytt kommersielt tilgjengelig medikament.

Mange av de biologisk aktive peptidene er av interesse for medisinsk bruk.Forbindelser som brukes kommersielt, så som insulin, produseres ofte av rekombinante DNA -overuttrykkssystemer som genererer store mengder av den ønskede forbindelsen.Ofte er peptidene genetisk konstruert for å lette rensing ved å få en slags tag lagt til frontene.Dette tillater bruk av affinitetskromatografi for å rense peptidet.

Med denne typen kromatografi er taggen en forbindelse, for eksempel histidin, som vil binde en matrise av perler, som nikkel, valgt for sin evne til å binde taggen.Uønskede proteiner og peptider passerer vanligvis gjennom kolonnen uten binding.Det spesifikt designet peptidet binder seg vanligvis sterkt til kolonnen.Etter at de forurensende proteiner og peptider er blitt vasket av, blir det ønskede peptidet eluert av en forbindelse som konkurrerer om binding til Than matrise.Den ene har da en ganske rent preparat av ønsket peptid, og taggen kan fjernes ved spaltning.