Jak działa bakteryjna testowanie endotoksyny?

Bakteryjne badanie endotoksyny zwykle obejmuje stosowanie odczynników, które po zmieszaniu w roztworze z możliwym zanieczyszczeniem powodują reakcję, co oznacza obecność endotoksyny.Testy chromogenne, test skrzepu żelowego i testy turbidymetryczne są metodami, których naukowcy zwykle stosują do testowania endotoksyny bakteryjnej.Technicy stosują te metody oceny w różnych substancjach i obiektach podczas sprawdzania zanieczyszczenia endotoksyny.Woda, surowce stosowane w tworzeniu leków, sprzętu i opakowania muszą przekazać standardy endotoksyny.

Bakterie, grzyby i wirusy mają ochronne błony zewnętrzne składające się z lipopolisacharydów, zwane również LPS.Część lipidowa tych łańcuchów zawiera endotoksyny.Substancje te zazwyczaj pozostają w błonie, ale są uwalniane podczas procesu podziału komórek i podczas zniszczenia lub lizy komórkowej.U ludzi substancje te powodują gorączkę, nieprawidłową krzepnięcie, wstrząs septyczny i inne objawy, chociaż w przeciwieństwie do egzotoksyn w komórce, endotoksyny nie przekształcają się w toksoid.Zasadniczo mikrobiolodzy sprawdzają obecność endotoksyn związanych z różnymi bakteriami Gram-ujemnymi, w tym e.coli .

Test skrzepowy żelowy lub test lizatów limulus ameecyte (LAL) obejmuje stosowanie chemikaliów zniszczających błonę z amebocytów kraba podkowego, również określana jako limulus polifemus. Technikowie obserwują pozytywne wskazanie endotoksynlub żelaza występuje, gdy lizat jest narażony na przedmiot lub substancję.Mikrobiolodzy zazwyczaj stosują tę metodę testowania endotoksyny bakteryjnej w połączeniu z badaniem chromogennym i turbidymetrycznym dla rozstrzygających wyników.

Chromogenne badanie endotoksyny bakteryjne wykorzystuje specjalnie obróbki LAL.Kiedy ta lizate kontaktuje się z endotoksyną, reakcja wytwarza określony kolor.Ostateczny proces testowania obejmuje pomiar zmętnienia lub zachmurzenia rozwiązania.Technicy narażają roztwór utworzony w teście skrzepu żelowego na spektrofotometr, który emituje wiązkę światła.Mierząc utratę intensywności światła w wiązce, która przechodzi przez roztwór, mikrobiolodzy mogą ustalić, czy endotoksyna jest obecna.

Lab Associates ogólnie uzupełniają te trzy testy endotoksyny bakteryjne dwa lub trzy razy w celu zapewnienia dokładnych wyników.Test żelowy nie jest stosowany wyłącznie, ponieważ jego najniższa granica wykrywania wynosi 0,03 jednostki Ehrlich na mililitr (UE/ml).Testowanie chromogenne i turbidymetryczne wykrywają endotoksyny w zakresie 0,005 UE/ML.Parametry bezpieczeństwa różnią się znacznie w zależności od testowanej substancji.Podczas gdy sterylna woda stosowana do celów wtrysku lub nawadniania może zawierać nie więcej niż 0,25 UE/ml, sterylna woda do celów inhalacyjnych może zawierać do 0,5 UE/ml.