Co to jest test wszechobecności?

Ubikwitynacja odnosi się do wiązania ubikwityny białkowej z innymi białkami przez trzy różne enzymy.Test ubikwitynacji jest testem, który określa, ile tego procesu występuje w komórce.Testy można zastosować do ustalenia, w jaki sposób różne warunki wpływają na wiązanie białka, etapy i struktury, które są ważne na szlaku ubikwitynnacji i ilości białka w komórce.Niewystarczające lub nadmiarowe kwoty powiązano z rozwojem wielu różnych chorób.

Białko występujące w komórkach, funkcją ubikwityny jest wiązanie z białkami, jednocześnie funkcjonując jako znacznik lub sygnał z innymi strukturami.Ten znacznik sygnalizuje enzymy, aby wiedzieć, że białko można zniszczyć, poddać recyklingowi lub przesunąć.Rezultatem jest zniszczenie lub transport białek.

Te białka znakujące są ważne dla naprawy DNA, infekcji wirusowych i odpowiedzi immunologicznej.Inne ważne funkcje obejmują rolę w śmierci komórek, podział komórkowy i rozwój komórek.Zbyt dużo ubikwityny lub jej braku może odgrywać rolę w tworzeniu wielu chorób, takich jak rak, zaburzenia genetyczne i choroby układu odpornościowego.

Badacze użyją testu ubikwitynacji, aby spróbować ustalić, które warunki zmieniają stężenie białka w komórce i porównywać chore komórki ze zdrowymi komórkami.Naukowcy używają go również do zbadania, jakie warunki spowodują zmiany w wiązaniu.Ponadto mogą próbować połączyć określony kod DNA z ilością enzymów w komórce.

Istnieje więcej niż jeden rodzaj testu ubikwitynacji, którego specjalizują się w naukowcach.Określić odsetek białek związanych z ubikintyną.Inny bada aktywność enzymów lub obecność innych pośrednich występujących w szlaku wszechobecności.Różne testy są opracowywane na podstawie docelowego białka, z którym wiąże się ubikwityna.

Podstawą testu ubikwitynacji jest włączenie związku oznaczonego za pomocą kolejnej łatwo zmierzonej chemikaliów.W testach onkologicznych ubikwityna może być znakowana kryptatem, związkiem zawierającym dwa atomy azotu.Można to wykorzystać do ustalenia, który enzym jest najbardziej aktywny w komórce.

Test ubikwitynacji będzie miał dwa kroki.Pierwszy to etap enzymatyczny, w którym enzymy będą wiązać znakowaną ubikwitynę z białkiem docelowym.Drugi to etap wykrywania, w którym badanie wiązania białka docelowego jest badane przy użyciu koniugatu, takiego jak przeciwciało.Przeciwciało fluoresuje lub zmieni kolor, co następnie pozwala badaczowi określić aktywność enzymów.