Co to jest biblioteka genów?

Biblioteka genowa jest terminem do pobrania fragmentów kwasu deoksyrybonukleinowego (DNA), które zostały sklonowane losowo z genomów organizmów.Są one sklonowane jako plazmidy, które mogą powtórzyć się oddzielnie od swoich chromosomów i fagów, które są wirusem pasożytniczym, który żywi się bakteriami.Gdy klonowane jako plazmidy, zbiór jest komórek gospodarza, a każda z komórek zawiera fragment DNA.Biblioteki genów faga składają się z tak zwanych lizatów faga, które są resztami zniszczonych komórek z wstawionym fragmentem DNA.Gdy biblioteki genowe zawierają zbiór wszystkich informacji genetycznych na temat organizmu, są one uważane za reprezentacyjną bibliotekę genową.

Dodatkowo biblioteki mogą używać komórkowego rekombinowanego kwasu nukleinowego (RNA) do materiału, a także zbiór komórek gospodarza z komórek gospodarza zRekombinowane wektory są znane jako biblioteka genów CRNA.Badania przesiewowe w bibliotece genów znajduje określone komórki zawierające wektory klonujące z konkretnym genem poszukiwanym w bibliotece genowej, a następnie wykorzystuje jedną z wielu technik ich izolowania i zbierania.Po zebraniu komórki są uważane za sklonowane.Aby mieć uzasadnioną szansę na izolowanie i klonowanie określonego genu, zwykle stosuje się tylko biblioteki genów reprezentacyjne jako każdy gen, a każdy oryginalny fragment DNA danego genomu są w nich zbierane.Aby osiągnąć 99% szans na zlokalizowanie konkretnego ludzkiego genu do klonowania, ponad 600 000 sklonowanych komórek trzeba było przesiewać, aby znaleźć pożądany gen z reprezentacyjnej biblioteki genów.

DNA jest ekstrahowane z organizmu, aby rozpocząć bibliotekę genów.Biblioteka jest skonstruowana w celu zorganizowania DNA i jego tysięcy różnych genów.Biblioteka staje się zbiorem dziesiątek tysięcy kolonii bakterii, każda modulowana fragmentem DNA z organizmu zawierającego gen o szczególnym zainteresowaniu.Biblioteki zawierają również enzymy restrykcyjne i plazmid.Enzymy restrykcyjne są używane do odczytu informacji nukleotydowej DNA i są używane do przecięcia DNA na fragmenty poprzez oddzielenie od siebie nukleotydów.

Te same enzymy restrykcyjne wycinają plazmidy bakteryjne, a fragmenty i plazmidy są łączone w rurce testowej w celu połączenia, tworząc nową kombinację.Te rekombinowane plazmidy są następnie powracane z powrotem do hodowli bakterii za pomocą szoku cieplnego lub elektroporacji.Kroki te są wykonywane w kółko, dopóki nie zostanie utworzona cała biblioteka genów dla określonego organizmu genomu ze wszystkich fragmentów oryginalnego ekstrakcji DNA.