Vad är plasmider?

Inom många olika bakterier kan små cirkulära bitar av DNA hittas i cytoplasma.Dessa DNA -cirklar är kända som plasmider, och de är åtskilda från det kromosomala DNA, eller DNA som bär generna för bakteriecellerna.Flera kopior av plasmiderna finns ofta vid en tidpunkt i bakteriecellen.Plasmider spelar en mycket viktig roll i genteknik, särskilt i genkloning.

När gener klonas sker vanligtvis processen inom bakterier.För att få genen som ska klonas in i bakterierna är en vektor nödvändig.En plasmid är vad som används som vektor, eftersom den enkelt kan passera från en cell till en annan.

Det finns ett antal steg involverade i genkloning innan du sätter in en plasmid i en värdcell.För det första måste genen som ska kopieras isoleras, liksom plasmiderna som ska användas som vektorer.När detta är gjort måste genen sättas in i plasmid -DNA.Plasmiden sätts sedan in i bakteriell värdcell för replikation.

För att isolera plasmider från bakterieceller måste cellerna initialt behandlas med enzymer för att bryta ner cellväggarna i bakterierna.Det större kromosomala DNA är separerat från de mindre plasmiderna med användning av en centrifug.Det isolerade plasmid-DNA är nu redo att få genen in i det.För att infoga den önskade genen skärs plasmid -DNA med restriktionsenzymer.Dessa enzymer skar endast DNA vid mycket specifika nukleotidsekvenser.När plasmid -DNA har klippts, läggs länksekvenser till de lösa ändarna som korrelerar med ändarna på genen som ska sättas in.Detta säkerställer att genen passar exakt i plasmiden.

När genen har lagts in i plasmiden är den nu redo att sättas in i en levande bakterie.Bakterier replikerar sina plasmider så att en enda cell kan innehålla många kopior.Det kan finnas upp till 200 kopior av en enda plasmid inom en bakterie.Om plasmiden införs i många bakterieceller kan många kopior av genen produceras relativt snabbt, särskilt när bakterieceller replikerar ungefär var 20: e minut.

Detta är processen som används för att skapa humant insulin.Genkodningen för insulin isolerades och infördes i en plasmid.Alla plasmiderna innehållande insulingenen infördes sedan i en bakterie, där de replikerades.Bakterierna fortsatte sedan att replikera sig själva, så att många miljoner celler som innehåller insulingenen kan skapas på mycket kort tid.Denna klonade gen ger nu en pålitlig källa för humant insulin.