Vad är en nordlig fläck?

Northern blot -hybridisering är en teknik som används för att detektera Messenger RNA (mRNA) -nivåer i ett prov och för att kvantifiera mängden mRNA som finns.Även om andra kraftfullare tekniker finns, förblir Northern Blot standarden på grund av dess enkelhet och användarvänlighet.Northern blotting -tekniken möjliggör också direkt jämförelse av flera prover i ett enda experiment.

Messenger RNA är en typ av nukleinsyra som produceras när en gen uttrycks.En gen som är påslagen och funktionell i en cell transkriberas till mRNA.MRNA transporteras sedan till cytoplasma i cellen, där det översätts till ett protein.Northern blot -analys av ett cellulärt mRNA -prov kan därför ge användbar information om utbudet av proteiner som cellen producerar.

I en norra blot är mRNA extraherad från celler och körs genom en denaturerande agarosgelelektrofores, som tillåter mRNA i provetatt separeras efter storlek.Prover av mRNA -molekyler i kända storlekar körs samtidigt för att ge en kontroll.När elektrofores är klar överförs proverna och immobiliseras på ett fast membran, vanligtvis tillverkat av ett material som nylon.Proverna exponeras sedan för radiomärkta sonder i flera timmar före analys.Under analysen kan mRNA som har hybridiserat till en radiomärkt sond tydligt detekteras med röntgen.

Den norra blotting -tekniken möjliggör observation av genuttrycksmönster mellan olika vävnadstyper.Messenger -RNA extraherat från celler från olika olika vävnader och orgeltyper kan jämföras, och cellulära svar på stress, infektion och många andra stimuli kan undersökas.Genom att titta på skillnader i mRNA -uttryck under olika förhållanden kan en forskare bestämma vilka typer av proteiner en cell producerar som svar på vissa stimuli.Detta kan ge ledtrådar om funktioner hos okända proteiner, eller när det gäller kända proteiner, information om cellulära svar på stimuli i fråga.

Till exempel kan en nordlig fläck visa att uttrycket av ett okänt protein ökar som svar på närvaron av ett specifikt toxin.Det kan då teoretiseras att proteinet är involverat i att minska toxiciteten, kanske genom att transportera kemikalien ur cellen eller omvandla den till en metabolit.Om kända proteiner undersöks kan dokumentering av förändringar i proteinuttryck ge information om själva svaret.Om expression av en känd molekyltransportör ökades, till exempel, kan det bekräftas att cellulärt svar på toxinet är att transportera toxinet ut ur cellen.