การทดสอบเอนโดทอกซินของแบคทีเรียทำงานอย่างไร

การทดสอบเอนโดท็อกซินในแบคทีเรียมักเกี่ยวข้องกับการใช้รีเอเจนต์ซึ่งเมื่อผสมในสารละลายที่มีสารปนเปื้อนที่เป็นไปได้ก่อให้เกิดปฏิกิริยาซึ่งบ่งบอกถึงการมีเอนโดท็อกซิน การทดสอบ chromogenic, การทดสอบก้อนเจลและการทดสอบ turbidimetric เป็นวิธีการที่นักวิทยาศาสตร์มักใช้ในการทดสอบ endotoxin ของแบคทีเรีย ช่างเทคนิคใช้วิธีการประเมินเหล่านี้กับสารและวัตถุต่าง ๆ เมื่อตรวจสอบการปนเปื้อนของเอนโดท็อกซิน น้ำวัตถุดิบที่ใช้ในการทำยาอุปกรณ์และบรรจุภัณฑ์จะต้องผ่านมาตรฐานเอนโดท็อกซิน

แบคทีเรียเชื้อราและไวรัสล้วนมีเยื่อหุ้มภายนอกป้องกันซึ่งประกอบด้วย lipopolysaccharides หรือที่เรียกว่า LPS ส่วนที่เป็นไขมันของโซ่เหล่านี้มีเอ็นโดท็อกซิน สารเหล่านี้โดยทั่วไปจะอยู่ภายในเมมเบรน แต่จะถูกปล่อยออกมาในระหว่างกระบวนการแบ่งเซลล์และระหว่างการทำลายเซลล์หรือสลาย ในมนุษย์สารเหล่านี้ทำให้เกิดไข้แข็งตัวผิดปกติช็อกติดเชื้อและอาการอื่น ๆ แม้ว่าจะแตกต่างจาก exotoxins ภายในเซลล์สารเอนโดท็อกซินจะไม่เปลี่ยนเป็นสารพิษ โดยทั่วไปนักจุลชีววิทยาจะตรวจสอบการมีอยู่ของสารเอนโดท็อกซินที่เกี่ยวข้องกับแบคทีเรียแกรมลบต่างๆรวมถึง เชื้ออีโคไล

การทดสอบก้อนเจลหรือการทดสอบ Limulus ameboecyte lysate (LAL) เกี่ยวข้องกับการใช้สารเคมีทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ที่ได้มาจากอะมีบาของปูเกือกม้าหรือที่เรียกว่า Limulus polyphemus ช่างเทคนิคสังเกตข้อบ่งชี้ในเชิงบวกของสารเอนโทท็อกซินหากจับตัวเป็นลิ่มหรือก่อเจลเกิดขึ้นเมื่อไลเซทสัมผัสกับวัตถุหรือสารที่เป็นปัญหา นักจุลชีววิทยามักจะใช้วิธีนี้ในการทดสอบเอนโดท็อกซินของแบคทีเรียร่วมกับการทดสอบ chromogenic และ turbidimetric เพื่อผลสรุป

การทดสอบ endotoxin จากแบคทีเรีย chromogenic ใช้ LAL ที่ผ่านการบำบัดเป็นพิเศษ เมื่อไลซีนนี้สัมผัสกับเอนโดทอกซินปฏิกิริยาจะสร้างสีเฉพาะ กระบวนการทดสอบขั้นสุดท้ายรวมถึงการวัดความขุ่นหรือความขุ่นของสารละลาย ช่างเทคนิคเปิดเผยวิธีการแก้ปัญหาที่เกิดขึ้นในการทดสอบเจลก้อนกับสเปคโตรโฟโตมิเตอร์ซึ่งปล่อยลำแสงออกมา ด้วยการวัดการสูญเสียความเข้มของแสงในลำแสงขณะที่ผ่านสารละลายจะทำให้จุลชีววิทยาสามารถตัดสินได้ว่ามีสารเอนโดท็อกซินหรือไม่

พนักงานห้องปฏิบัติการโดยทั่วไปทำการทดสอบเอนโดท็อกซินทั้งสามของแบคทีเรียให้เสร็จสองหรือสามครั้งเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ถูกต้อง การทดสอบเจลไม่ได้ใช้เป็นการเฉพาะเนื่องจากขีด จำกัด การตรวจจับต่ำสุดคือ 0.03 Ehrlich หน่วยต่อมิลลิลิตร (EU / ml) การทดสอบ Chromogenic และ turbidimetric ตรวจจับสารเอนโดท็อกซินในช่วง 0.005 EU / ml พารามิเตอร์ความปลอดภัยแตกต่างกันมากขึ้นอยู่กับสารที่ถูกทดสอบ ในขณะที่น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อใช้สำหรับการฉีดหรือการชลประทานสามารถมีได้ไม่เกิน 0.25 EU / ml แต่น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อสำหรับการสูดดมอาจมีมากถึง 0.5 EU / ml