ขั้นตอนของ ELISA เริ่มขึ้นในคลินิกโดยมีตัวอย่างเลือดจากผู้ป่วย จากนั้นจึงมีหลายขั้นตอนโดยใช้ชุดทดสอบ ELISA ในห้องปฏิบัติการ การทดสอบจะตรวจจับการมีอยู่ของแอนติบอดีหรือแอนติเจนของโรคเช่นเอชไอวีในเลือด ขั้นตอนรวมถึงการเพิ่มสารต่าง ๆ และซักผ้าและผลการวัดโดยทั่วไปโดยการเปลี่ยนสี
immunosorbent assay (ELISA) ซึ่งถูกเรียกว่าเอนไซม์ immunoassay (EIA) นั้นใช้ในการทดสอบวินิจฉัย มันเป็นที่รู้จักกันดีที่สุดในฐานะการทดสอบวินิจฉัยสำหรับเอชไอวี แผ่นทดสอบมักจะประกอบไปด้วยหลุมขนาดเล็ก 96 หลุมซึ่งแอนติเจนจำเพาะจะถูกตรึง หากแอนติบอดีมีอยู่ในตัวอย่างในซีรั่มมันจะจับกับแอนติเจนทำให้สามารถตรวจจับได้ในขั้นตอนต่าง ๆ ของกระบวนการ ELISA
ขั้นตอนแรกในขั้นตอน ELISA คือการได้รับตัวอย่างจากผู้ป่วย สิ่งนี้กระทำโดยพยาบาลภายใต้สภาวะปลอดเชื้อ เลือดมักจะนำมาจากหลอดเลือดดำที่แขนหรือมือ สายรัดจะถูกวางไว้บนแขนเพื่อบวมเส้นเลือดและทำให้ขั้นตอนง่ายขึ้นและทำความสะอาดผิวที่จะแทรกเข็ม อาจรู้สึกว่ามีหนามเล็ก ๆ น้อย ๆ เมื่อเข็มเข้าไปและเลือดจะถูกเก็บในหลอดที่ปลอดเชื้อ
หลังจากเก็บตัวอย่างเลือดแล้วมันจะถูกถ่ายโอนไปยังห้องแล็บซึ่งช่างเทคนิคห้องปฏิบัติการที่เหลือจะดำเนินการโดย ELISA ตัวอย่างเลือดจะถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมของแผ่น ELISA ก่อน ถ้ามีแอนติบอดีจำเพาะจะจับกับแอนติเจน จากนั้นล้างจานโดยใช้บัฟเฟอร์เพื่อกำจัดแอนติบอดี้ที่ไม่ได้ผูกไว้
แอนติบอดีตัวที่สองซึ่งตามปกติจะเป็นสัตว์ซึ่งมีเอ็นไซม์ที่ติดอยู่นั้นจะถูกเพิ่มเข้าไปซึ่งจะจับกับแอนติบอดี - แอนติเจนที่ซับซ้อน ล้างจานอีกครั้งเพื่อลบส่วนเกิน เอนไซม์จะทำปฏิกิริยากับสีเมื่อมีการเพิ่มวัสดุพิมพ์ในตอนท้ายของขั้นตอน ELISA เป็นการวัดระดับการเปลี่ยนสีที่ให้ผลลัพธ์
ต้องปฏิบัติตามขั้นตอนของ ELISA อย่างระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงผลลัพธ์ที่ผิดพลาด ในเพลต ELISA ส่วนใหญ่จะมีการควบคุมแบบบวกและลบเพื่อลดผลลัพธ์ที่ผิดเช่นนั้น เมื่อทำการทดสอบเอชไอวีผลบวกจะตามมาด้วยการยืนยันการทดสอบครั้งที่สองประเภทที่แตกต่างกันเช่น Western Blot
