การทดสอบ ubiquitination คืออะไร?

ubiquitination หมายถึงการจับตัวของโปรตีน ubiquitin กับโปรตีนอื่น ๆ โดยเอนไซม์ที่แตกต่างกันสามตัวการทดสอบ ubiquitination เป็นการทดสอบที่กำหนดว่ากระบวนการนี้เกิดขึ้นภายในเซลล์มากน้อยเพียงใดการทดสอบสามารถใช้เพื่อกำหนดว่าเงื่อนไขที่แตกต่างกันมีผลต่อการจับโปรตีนขั้นตอนและโครงสร้างที่มีความสำคัญในเส้นทาง ubiquitinnation และปริมาณโปรตีนในเซลล์จำนวนเงินที่ไม่เพียงพอหรือไม่เพียงพอได้เชื่อมโยงกับการพัฒนาของโรคต่าง ๆ มากมาย

โปรตีนที่พบในเซลล์ฟังก์ชั่นของ ubiquitin คือการผูกกับโปรตีนในขณะที่ทำหน้าที่เป็นแท็กหรือสัญญาณไปยังโครงสร้างอื่น ๆแท็กนี้จะส่งสัญญาณเอนไซม์ให้รู้ว่าโปรตีนสามารถถูกทำลายรีไซเคิลหรือเคลื่อนย้ายผลที่ได้คือการทำลายหรือการขนส่งของโปรตีน

โปรตีนที่ติดแท็กเหล่านี้มีความสำคัญต่อการซ่อมแซม DNA การติดเชื้อไวรัสและการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันฟังก์ชั่นที่สำคัญอื่น ๆ ได้แก่ บทบาทในการตายของเซลล์การแบ่งเซลล์และการพัฒนาของเซลล์ubiquitin มากเกินไปหรือขาดมันอาจมีบทบาทในการก่อตัวของโรคต่าง ๆ เช่นมะเร็งความผิดปกติทางพันธุกรรมและโรคของระบบภูมิคุ้มกัน

นักวิจัยจะใช้การทดสอบ ubiquitination เพื่อพยายามกำหนดเงื่อนไขที่เปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของโปรตีนในเซลล์และเปรียบเทียบเซลล์ที่เป็นโรคกับเซลล์ที่มีสุขภาพดีนักวิทยาศาสตร์ยังใช้เพื่อตรวจสอบเงื่อนไขว่าจะทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในการเชื่อมโยงนอกจากนี้พวกเขาอาจพยายามเชื่อมโยงรหัสดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงกับปริมาณของเอนไซม์ในเซลล์

มีการทดสอบ ubiquitination มากกว่าหนึ่งประเภทที่นักวิทยาศาสตร์การวิจัยใช้โดยเฉพาะหนึ่งจะกำหนดเปอร์เซ็นต์ของโปรตีนที่ผูกพันกับ ubiquintinอีกครั้งตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์หรือการปรากฏตัวของตัวกลางอื่น ๆ ที่พบในเส้นทางการแพร่หลายการทดสอบที่แตกต่างกันได้รับการพัฒนาขึ้นอยู่กับโปรตีนเป้าหมายที่ ubiquitin จะผูกมัด

พื้นฐานของการทดสอบ ubiquitination คือการรวมสารประกอบที่มีป้ายกำกับโดยใช้สารเคมีที่วัดได้ง่ายในการทดสอบด้านเนื้องอกวิทยา ubiquitin สามารถติดฉลากด้วยด่าง) สารประกอบที่มีอะตอมไนโตรเจนสองอะตอมสิ่งนี้สามารถใช้ในการพิจารณาว่าเอนไซม์ใดที่ใช้งานได้มากที่สุดในเซลล์

การทดสอบ ubiquitination จะมีสองขั้นตอนครั้งแรกคือขั้นตอนของเอนไซม์ที่เอนไซม์จะผูก ubiquitin ที่มีป้ายกำกับกับโปรตีนเป้าหมายประการที่สองคือขั้นตอนการตรวจจับที่มีการตรวจสอบโปรตีนเป้าหมายโดยใช้คอนจูเกตเช่นแอนติบอดีแอนติบอดีจะฟลูออเรสเซหรือเปลี่ยนสีซึ่งจะช่วยให้นักวิจัยกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์