การตัดชิ้นเนื้อของเนื้อเยื่อมะเร็งที่น่าสงสัยเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยโรคมะเร็งต่อมลูกหมาก แต่มีการทดสอบเพิ่มเติมจำนวนหนึ่งที่ใช้ในการแยกแยะเงื่อนไขอื่น ๆ ยกตัวอย่างเช่นการทดสอบปัสสาวะสามารถแยกแยะการติดเชื้อในขณะที่การตรวจทางทวารหนักช่วยให้แพทย์สามารถประเมินต่อมลูกหมากด้วยตนเองสำหรับความผิดปกติ หากสงสัยว่ามีการวินิจฉัยโรคมะเร็งต่อมลูกหมากจะต้องมีการตรวจชิ้นเนื้อ เนื้อเยื่อต่อมลูกหมากชิ้นเล็ก ๆ จะถูกเอาออกผ่านทางทวารหนักและตรวจดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เพื่อหาสัญญาณของโรคมะเร็ง หากค้นพบโรคมะเร็งมันจะถูกจัดอันดับในระดับ Gleason ด้วยคะแนนที่สูงขึ้นหมายถึงรูปแบบของมะเร็งที่ก้าวร้าวมากขึ้น
สำหรับการวินิจฉัยมะเร็งต่อมลูกหมากแพทย์มักทำการทดสอบหลายอย่าง วัตถุประสงค์ของการทดสอบเหล่านี้คือการกำจัดสาเหตุที่เป็นไปได้อื่น ๆ ของอาการเช่นการติดเชื้อและเพื่อรวบรวมข้อมูลเกี่ยวกับต่อมลูกหมาก การตรวจชิ้นเนื้อซึ่งชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของเนื้อเยื่อจะถูกลบออกและตรวจสอบโดยทั่วไปคือการทดสอบเพียงอย่างเดียวที่สามารถยืนยันสภาพได้
แพทย์อาจต้องการยกเลิกความเป็นไปได้ของการติดเชื้อเพราะอาจทำให้เกิดอาการคล้ายมะเร็งต่อมลูกหมาก ในการทำเช่นนั้นจำเป็นต้องมีการทดสอบปัสสาวะ การตรวจทางทวารหนักแบบดิจิทัลก็เป็นเรื่องธรรมดาเช่นนี้ทำให้แพทย์สามารถตรวจสอบความผิดปกติในต่อมลูกหมากได้ การทดสอบอื่น ๆ ได้แก่ cystoscopy ซึ่งเกี่ยวข้องกับการใส่กล้องเข้าไปในกระเพาะปัสสาวะและการทำคลื่นเสียงความถี่สูง หลังใช้คลื่นเสียงเพื่อสร้างภาพของต่อมลูกหมาก
ข้อกำหนดที่สำคัญในการวินิจฉัยโรคมะเร็งต่อมลูกหมากคือการตรวจชิ้นเนื้อ การทดสอบอื่น ๆ สามารถช่วยแพทย์ในการเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับต่อมลูกหมากของผู้ป่วยและกำจัดความเป็นไปได้อื่น ๆ แต่การตรวจสอบเนื้อเยื่อของต่อมลูกหมากนั้นเป็นรูปแบบการวินิจฉัยที่เชื่อถือได้เท่านั้น หากแพทย์สงสัยว่าผู้ชายคนหนึ่งอาจเป็นมะเร็งต่อมลูกหมากการตรวจชิ้นเนื้อมักจะถูกสั่งให้เร็วเพราะการวินิจฉัยในระยะแรกจะเพิ่มโอกาสในการรักษาที่ประสบความสำเร็จ
เพื่อทำการตรวจชิ้นเนื้อมะเร็งต่อมลูกหมากเนื้อเยื่อชิ้นเล็ก ๆ จะถูกลบออก แพทย์เข้าถึงต่อมลูกหมากผ่านทางทวารหนักด้วยเครื่องมือที่ออกแบบมาเป็นพิเศษ แม้ว่าการตรวจชิ้นเนื้อของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากจะรู้สึกไม่สบาย แต่ก็มักจะทำในลักษณะผู้ป่วยนอก ซึ่งหมายความว่าผู้ป่วยไม่ค่อยต้องพักค้างคืนในโรงพยาบาล
เมื่อเนื้อเยื่อถูกลบออกไปแล้วมันสามารถตรวจสอบได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เพื่อการวินิจฉัยโรคมะเร็งต่อมลูกหมากที่เป็นไปได้ หากค้นพบโรคมะเร็งมันจะถูกจัดอันดับโดยใช้สเกลที่เรียกว่า "คะแนน Gleason" ยิ่งคะแนนสูงเท่าไรมะเร็งก็ยิ่งก้าวร้าวและอันตรายมากขึ้นเท่านั้น
