ระดับฟอสโฟรีเลชั่นถูกกำหนดอย่างไร?

ระดับฟอสโฟรีเลชั่นของโมเลกุลหรือสารอินทรีย์ถูกกำหนดโดยสองวิธี: การซับแบบตะวันตกและสเปคโตรเมตรีมวลฟอสโฟรีเลชั่นส่วนใหญ่มักหมายถึงสิ่งที่แนบมาของฟอสเฟตกับโปรตีนเมื่อฟอสเฟตติดกับโปรตีนกระบวนการและหน้าที่ตามธรรมชาติของเอนไซม์โปรตีนภายในร่างกายมนุษย์จะถูกรบกวนการกำหนดระดับฟอสโฟรีเลชั่นมีความสำคัญต่อการรักษาโรคที่หลากหลายตั้งแต่มะเร็งไปจนถึงโรคเบาหวาน

การซับแบบตะวันตกเป็นวิธีที่ได้รับความนิยมที่ใช้ในการกำหนดระดับฟอสโฟรีเลชั่นของโปรตีนชุดเฉพาะแอนติบอดีเช่น anti-phospho-tyrosine monoclonal antibodies มักจะใช้เพราะมันผูกกับโปรตีนไทโรซีนที่ตกค้างซึ่งได้รับผลกระทบจากฟอสโฟรีเลชั่นในการซับแบบตะวันตกโปรตีนจะถูกแยกออกเป็นครั้งแรกด้วยขนาดโดยใช้วิธีการชาร์จไฟฟ้าที่เรียกว่าเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส

โปรตีนจะถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรนที่ถูกปกคลุมด้วยแอนติบอดีพิเศษที่จับกับฟอสเฟตบนโปรตีนเมื่อโปรตีนถูกถ่ายโอนแอนติบอดีจะติดกับโปรตีนใด ๆ ที่มีฟอสเฟตที่แนบมาระดับฟอสโฟรีเลชั่นสามารถกำหนดได้โดยเอ็กซ์เรย์ของเมมเบรนโปรตีนที่ได้รับผลกระทบใด ๆ จะให้แสงแฟลชทำให้ผู้วิจัยสามารถวัดระดับฟอสโฟรีเลชั่นได้ง่ายขึ้น

มวลสารสเปกโตรเมตรีเป็นอีกวิธีหนึ่งในการวัดระดับฟอสโฟรีเลชั่นของสารกระบวนการนี้แปลงโมเลกุลโปรตีนเป็นไอออนซึ่งทำให้ง่ายต่อการติดตามและวัดตัวอย่างถูกทำให้เป็นไอออนโดยแหล่งไอออนที่มีพลังสูงซึ่งมีตัวอย่างด้วยอิเล็กตรอนการกระทำนี้เปลี่ยนตัวอย่างเป็นไพเพอร์ไอออนที่มีประจุบวก

เครื่องวิเคราะห์มวลของสเปกโตรมิเตอร์มวลแยกไอออนด้วยมวลและความเข้มของประจุสิ่งนี้ช่วยให้นักวิจัยค้นพบอัตราส่วนมวลต่อการเรียกเก็บซึ่งเป็นสิ่งสำคัญในการค้นพบระดับฟอสโฟรีเลชั่นของตัวอย่างในที่สุดเครื่องตรวจจับจะวัดไอออนตามลำดับเพื่อให้ข้อมูลสามารถแสดงในรูปแบบแผนภูมิแผนภูมิแสดงอัตราส่วนมวลต่อการชาร์จของไอออนบนแกน x และความเข้มสัมพัทธ์ของไอออนบนแกน y

ระดับฟอสโฟรีเลชั่นสามารถวัดได้ในระหว่างฟอสโฟรีเลชั่นของสารตั้งต้นสารตั้งต้นฟอสโฟรีเลชั่นเป็นกระบวนการที่สร้าง adenosine triphosphate (ATP) ซึ่งเป็นโมเลกุลที่สำคัญต่อการถ่ายโอนพลังงานระหว่างเซลล์ในระหว่าง glycolysisกระบวนการนี้เกิดขึ้นทั้งในเซลล์สัตว์และเซลล์พืช

ในเซลล์พืชโมเลกุล ATP ถูกสร้างขึ้นโดยใช้พลังงานจากดวงอาทิตย์พลังงานนี้กระตุ้นฟอสโฟรีเลชั่นในพืชคลอโรพลาสต์ซึ่งเป็นที่ตั้งของการสังเคราะห์ด้วยแสงพืชระดับของฟอสโฟรีเลชั่นมีความสัมพันธ์กับปริมาณของฟอสเฟตที่จำเป็นในการสร้างโมเลกุล ATP เพิ่มเติม