บล็อตภาคเหนือคืออะไร?

Hybridization Northern Blot เป็นเทคนิคที่ใช้ในการตรวจจับระดับ Messenger RNA (mRNA) ในตัวอย่างและเพื่อหาปริมาณของ mRNA ที่มีอยู่แม้ว่าจะมีเทคนิคที่มีประสิทธิภาพอื่น ๆ แต่ก็ยังคงเป็นเทคนิคที่ทรงพลัง แต่ก็ยังคงเป็นมาตรฐานเนื่องจากความเรียบง่ายและความสะดวกในการใช้งานเทคนิคการซับในภาคเหนือยังช่วยให้สามารถเปรียบเทียบตัวอย่างหลายตัวอย่างได้โดยตรงในการทดลองเดียว

Messenger RNA เป็นกรดนิวคลีอิกชนิดหนึ่งซึ่งผลิตขึ้นเมื่อมีการแสดงออกของยีนยีนที่เปิดและการทำงานภายในเซลล์จะถูกถอดความเป็น mRNAmRNA จะถูกส่งไปยังไซโตพลาสซึมของเซลล์ซึ่งแปลเป็นโปรตีนการวิเคราะห์ blot ทางเหนือของตัวอย่าง mRNA เซลล์จึงสามารถให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์เกี่ยวกับอาร์เรย์ของโปรตีนที่เซลล์ผลิต

ใน blot ทางเหนือ mRNA จะสกัดจากเซลล์และวิ่งผ่าน denaturing agarose gel electrophoresis ซึ่งช่วยให้ mRNA ในตัวอย่างตัวอย่างจะแยกออกจากขนาดตัวอย่างโมเลกุล mRNA ที่มีขนาดที่รู้จักจะทำงานในเวลาเดียวกันเพื่อให้การควบคุมเมื่ออิเล็กโทรโฟเรซิสเสร็จสมบูรณ์ตัวอย่างจะถูกถ่ายโอนและตรึงบนเยื่อหุ้มเซลล์ที่เป็นของแข็งโดยทั่วไปจะทำจากวัสดุเช่นไนลอนตัวอย่างจะถูกสัมผัสกับโพรบ radiolabeled เป็นเวลาหลายชั่วโมงก่อนการวิเคราะห์ในระหว่างการวิเคราะห์ mRNA ที่มีการผสมพันธุ์กับโพรบ radiolabeled สามารถตรวจพบได้อย่างชัดเจนโดยใช้ X-ray

เทคนิคการซับในภาคเหนือช่วยให้การสังเกตรูปแบบการแสดงออกของยีนระหว่างเนื้อเยื่อชนิดต่าง ๆMessenger RNA ที่สกัดจากเซลล์ของเนื้อเยื่อและชนิดต่าง ๆ สามารถเปรียบเทียบได้และการตอบสนองของเซลล์ต่อความเครียดการติดเชื้อและสิ่งเร้าอื่น ๆ อีกมากมายสามารถตรวจสอบได้โดยการดูความแตกต่างในการแสดงออกของ mRNA ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันนักวิทยาศาสตร์สามารถกำหนดชนิดของโปรตีนที่เซลล์ผลิตในการตอบสนองต่อสิ่งเร้าบางอย่างสิ่งนี้สามารถให้เบาะแสเกี่ยวกับฟังก์ชั่นของโปรตีนที่ไม่รู้จักหรือในกรณีของโปรตีนที่รู้จักข้อมูลเกี่ยวกับการตอบสนองของเซลล์ต่อสิ่งเร้าที่เป็นปัญหา

ตัวอย่างเช่น blot ทางเหนืออาจแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของโปรตีนที่ไม่รู้จักเพิ่มขึ้นในการตอบสนองต่อการปรากฏตัวของสารพิษเฉพาะจากนั้นอาจเป็นทฤษฎีที่ว่าโปรตีนมีส่วนร่วมในการลดความเป็นพิษบางทีโดยการขนส่งสารเคมีออกจากเซลล์หรือแปลงเป็นเมตาโบไลต์หากโปรตีนที่รู้จักอยู่ระหว่างการตรวจสอบการบันทึกการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของโปรตีนสามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับการตอบสนองของตัวเองหากการแสดงออกของการขนย้ายโมเลกุลที่รู้จักเพิ่มขึ้นตัวอย่างเช่นสามารถยืนยันได้ว่าการตอบสนองของเซลล์ต่อสารพิษคือการขนส่งสารพิษออกจากเซลล์