การทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์คืออะไร?

เปปไทด์เป็นโพลีเมอร์ขนาดเล็กที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนหลายคนมีความกระตือรือร้นทางชีวภาพเช่นฮอร์โมนสารพิษหรือมีความสามารถอื่น ๆสารประกอบดังกล่าวมักใช้ในการวิจัยทางชีววิทยาการแพทย์และเคมีพวกเขายังทำหน้าที่เป็นหน่วยการสร้างโปรตีนเมื่อจำนวนของพวกเขาเชื่อมโยงเข้าด้วยกันการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์เป็นเทคนิคที่ใช้ในการชำระล้างเปปไทด์ที่ต้องการในปริมาณมากหรือเพื่อช่วยแยกเปปไทด์ที่สร้างขึ้นจากการย่อยโปรตีน

การทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ทำได้โดยใช้เทคนิคของโครมาโตกราฟีแตกต่างกับเมทริกซ์ทางกายภาพโครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันสูง (HPLC) มักใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์เปปไทด์หรือเปปไทด์ถูกนำไปใช้ในส่วนผสมของตัวทำละลายที่เปลี่ยนแปลงตลอดเวลาขณะที่ถูกสูบข้ามคอลัมน์ของลูกปัดขนาดเล็กที่ความดันสูงเปปไทด์ที่แตกต่างกัน elute ณ จุดเวลาที่แตกต่างกันและตรวจพบโดยจอภาพบ่อยครั้งเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV

เมื่อทำการวิจัยเกี่ยวกับเปปไทด์ซึ่งมักจะเป็นสารที่น่าสนใจและไม่สามารถซื้อได้จาก บริษัท เคมีหากโครงสร้างของเปปไทด์ที่ต้องการเป็นที่รู้จักกันบ่อยครั้งจะง่ายต่อการเตรียมทางเคมีโดยการสังเคราะห์เปปไทด์มากกว่าที่จะแยกสารออกจากแหล่งธรรมชาติการแยกผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติเป็นเรื่องยากเปปไทด์สังเคราะห์โดยทั่วไปจะถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC. การสังเคราะห์สารเคมีดังกล่าวอาจเป็นเรื่องที่น่ากลัวสำหรับนักวิจัยอิสระที่ไม่ใช่นักเคมีบ่อยครั้งงานนี้ถูกทำสัญญากับ บริษัท สังเคราะห์เปปไทด์ที่เชี่ยวชาญในเทคนิคเหล่านี้นี่อาจประหยัดกว่าพยายามตั้งค่าระบบตั้งแต่เริ่มต้นในห้องปฏิบัติการบริษัท เปปไทด์สามารถสร้างเปปไทด์ที่กำหนดเองได้ตามความต้องการของนักวิจัย

เหตุผลอื่นสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์อาจเป็นเมื่อนักวิจัยได้ชำระโปรตีนให้บริสุทธิ์และพยายามที่จะกำหนดตัวตนของมันเขาหรือเธอสามารถลดโปรตีนลงในชิ้นส่วนเปปไทด์แยกชิ้นส่วนโดยการทำให้บริสุทธิ์และมีรูปแบบการกระจายตัวของเปปไทด์ที่ตรวจพบโดยสเปคโตรมิเตอร์มวลขณะที่พวกมันออกจากคอลัมน์เทคนิคนี้เรียกว่า LC-MS สั้นสำหรับสเปกโตรเมตรีโครมาโตกราฟีของเหลวมันให้น้ำหนักโมเลกุลและองค์ประกอบของกรดอะมิโนของชิ้นส่วนและมักจะช่วยให้สามารถระบุโปรตีนได้หากมีการระบุที่คล้ายกันหรือเหมือนกันก่อนหน้านี้

นักวิจัยหลายคนทำงานกับเปปไทด์ที่มีคุณสมบัติใหม่เช่นกรดอะมิโนที่ผิดธรรมชาติลองและค้นหากิจกรรมที่มีกิจกรรมทางชีวภาพที่ผิดปกติมีทั้งสนามที่เรียกว่า peptidomimetics ที่อุทิศให้กับการศึกษาของเปปไทด์ใหม่ ๆบ่อยครั้งที่การออกแบบลำดับที่สร้างโดยคอมพิวเตอร์ได้รับการออกแบบและไลบรารีเปปไทด์ถูกสังเคราะห์ที่ครอบคลุมช่วงของเปปไทด์ผิดปกติการทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์ใช้เพื่อแยกสมาชิกแต่ละคนของห้องสมุดนี้เพื่อให้เปปไทด์บริสุทธิ์เพื่อทดสอบกิจกรรมทางชีวภาพกลยุทธ์นี้ประสบความสำเร็จในการสร้างยาเสพติดอย่างน้อยหนึ่งตัวที่มีความพร้อมในเชิงพาณิชย์

เปปไทด์ที่ใช้งานทางชีววิทยาหลายแห่งเป็นที่สนใจสำหรับการใช้งานทางการแพทย์สารประกอบที่ใช้ในเชิงพาณิชย์เช่นอินซูลินมักผลิตโดยระบบการแสดงออกของดีเอ็นเอ recombinant ที่สร้างสารประกอบที่ต้องการจำนวนมากบ่อยครั้งที่เปปไทด์ได้รับการออกแบบทางพันธุกรรมเพื่ออำนวยความสะดวกในการทำให้บริสุทธิ์โดยมีแท็กบางประเภทเพิ่มเข้าไปในหน้าของพวกเขาสิ่งนี้ช่วยให้การใช้โครมาโตกราฟี Affinity เพื่อชำระล้างเปปไทด์

ด้วยโครมาโตกราฟีประเภทนี้แท็กเป็นสารประกอบเช่นฮิสทิดีนที่จะผูกเมทริกซ์ของลูกปัดเช่นนิกเกิลที่เลือกสำหรับความสามารถในการผูกแท็กโดยทั่วไปโปรตีนและเปปไทด์ที่ไม่พึงประสงค์จะผ่านคอลัมน์โดยไม่ผูกมัดเปปไทด์ที่ออกแบบมาโดยเฉพาะมักจะผูกกับคอลัมน์อย่างมากหลังจากการล้างโปรตีนและเปปไทด์ที่ปนเปื้อนได้ถูกชะล้างออกไปเปปไทด์ที่ต้องการจะถูกชะออกโดยสารประกอบที่แข่งขันกันเพื่อผูกมัดกับ Tเขาเมทริกซ์หนึ่งมีการเตรียมเปปไทด์ที่ต้องการอย่างแท้จริงและแท็กสามารถลบออกได้โดยความแตกแยก