จุด Isoelectric คืออะไร?

โปรตีนถูกสร้างขึ้นจากโซ่ของกรดอะมิโนแต่ละชนิดมีค่า pH ที่แตกต่างกันค่า pH โดยรวมของโปรตีนประกอบด้วยส่วนผสมของค่า pH ของกรดอะมิโนแต่ละตัวในขณะที่พวกมันสร้างไอออนในสารละลายเฉพาะที่พวกมันละลายจุดไอโซอิเล็กทริก (PI) ของโปรตีนคือค่า pH ที่โปรตีนนั้นไม่มีประจุสุทธิคุณสมบัตินี้สามารถถูกนำไปใช้เพื่อแยกโปรตีนออกจาก PI ที่รู้จักออกมาจากโปรตีนอื่น ๆ ในส่วนผสมที่แตกต่างกัน

กรดอะมิโนมีกลุ่มเทอร์มินัลอะมิโนที่เป็นพื้นฐานมีค่า pH สูงปลายอีกด้านของกรดอะมิโนคือขั้วคาร์บอกซิลที่เป็นกรดโดยมีค่า pH ต่ำที่ค่า pH ที่แตกต่างกันกรดอะมิโนบนโปรตีนจะแตกต่างกันไปในประจุโปรตีนด้านล่างจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกเขามีประจุบวกในทางตรงกันข้ามผู้ที่อยู่เหนือจุดนี้มีประจุลบ

เพื่อใช้ประโยชน์จากความรู้เกี่ยวกับจุดไอโซอิเล็กทริกสำหรับการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนส่วนผสมของโปรตีนจะอยู่ภายใต้สนามไฟฟ้าสิ่งนี้มักทำใน agarose หรือ polyacrylamide gels และเป็นที่รู้จักกันในชื่อการโฟกัส isoelectricเทคนิคที่เก่ากว่าคือการดำเนินการตามขั้นตอนในระดับที่ใหญ่ขึ้นในคอลัมน์แก้วโดยใช้สารละลายซูโครสกับขั้วไฟฟ้าที่ปลายแต่ละด้านสารประกอบที่เรียกว่าแอมโฟไลต์ถูกเพิ่มเข้ามาซึ่งทำให้เกิดการก่อตัวของการไล่ระดับสี pH ที่สอดคล้องกันเมื่อเจลหรือคอลัมน์อยู่ภายใต้กระแสไฟฟ้าโปรตีนจะอพยพจนกว่าพวกเขาจะไปถึงจุด isoelectric ของพวกเขาแล้วยังคงอยู่กับที่

โปรตีนบนเจลมักจะมองเห็นได้โดยสีย้อมที่จับโปรตีนบางครั้งหากมีการศึกษาเอนไซม์สามารถใช้สารตั้งต้นที่ให้ปฏิกิริยาสีโดยปกติแล้วจะใช้มาตรฐานที่มีโปรตีนที่มีจุดไอโซอิเล็กทริกที่รู้จัก

เมื่อมีใครรู้ว่าโปรตีนที่ต้องการอยู่ที่ไหนเทคนิคทั่วไปคือการตัดโปรตีนที่แยกออกจากเจลโปรตีนสามารถทำให้บริสุทธิ์และจัดลำดับเมื่อทราบลำดับแล้วมันสามารถใช้ในการออกแบบไพรเมอร์สำหรับปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) และใช้ในการโคลนยีนสำหรับโปรตีนหากมีวัสดุกรดนิวคลีอิกที่เหมาะสมโปรตีนที่เกี่ยวข้องเพื่อดูว่ามันแตกต่างกันอย่างไรจากกันและกันภาวะแทรกซ้อนอย่างหนึ่งอาจเป็นไปได้ว่าโปรตีนสามารถมีน้ำตาลที่ถูกผูกไว้กับพวกเขาสิ่งนี้เรียกว่า glycosylation และอาจส่งผลกระทบต่อ PI ของโปรตีนมันอาจดูเหมือนว่ามีโปรตีนหลายชนิดที่มีจุดไอโซอิเล็กทริกที่แตกต่างกันเมื่อในความเป็นจริงมีเพียงโปรตีนเดียวที่ได้รับ glycosylated ที่แตกต่างกันโปรตีนที่บริสุทธิ์โดยวิธีมาตรฐานเช่นโครมาโตกราฟีบางครั้งวิเคราะห์โดยการโฟกัส isoelectric เพื่อให้แน่ใจว่ามีความบริสุทธิ์