Bir enzime bağlı immünosorbent deneyi (ELISA), bir biyolojik numunedeki protein seviyelerini belirlemek için bir immünoloji laboratuarında gerçekleştirilen bir testtir. ELISA tespiti, bağlı enzim etiketli antikor içeren plastik bir plakaya berrak bir çözeltinin veya substratın eklendiği testin son aşamasını belirtir. Enzim substratı yarır ve bir renk değişimi meydana gelir. Nihai renkli çözeltinin ışık emilimi daha sonra bir ELISA plaka okuyucu veya spektrofotometre üzerinde ölçülür.
Çeşitli ELISA testleri vardır, bunlardan en yaygın olanı dolaylı ELISA ve yakalama ya da sandviç ELISA'dır. Dolaylı ELISA, bir hastanın serumunda bir antikor olarak bilinen bir proteini tespit etmek için kullanılır. Dolaylı bir ELISA testinin bir örneği, HIV'e karşı antikorları tespit etmek için kullanılan insan immün yetmezlik virüsü (HIV) testidir. Sandviç ELISA testi, iki antikor arasında yakalayarak bir proteini veya antijeni tespit eder. Gebelikte yükselen insan koryonik gonadotropin (hCG) hormonunun tespiti sandviç ELISA testi ile yapılır.
Her iki test de testin sonunda bir ELISA tespit adımına sahiptir. Bu adım, kendisine bağlı bir enzim molekülüne sahip bir antikorun eklenmesini içerir. Enzim etiketli antikorun eklenmesinden sonra, bu enzime özgü substrat molekülünü içeren renksiz bir çözelti eklenir. Enzim, substrat molekülünü ayırır ve çözelti, kullanılan kombinasyona bağlı olarak renk değiştirir. Hasta örneğindeki antikor veya antijen miktarının belirlenmesi, renk değişiminin yoğunluğu ölçülerek yapılır.
ELISA saptama adımında kullanım için çeşitli enzim substrat kombinasyonları mevcuttur. En yaygın enzim, diğerleri arasında, substrat moleküllerini orto-fenilendiamin dihidroklorür (OPD) ve tetrametilbenzidin'i (TMB) parçalayabilen yaban turpu peroksidazıdır (HRP). Hem OPD'nin hem de TMB'nin ayrılması sarı bir renkle sonuçlanır ve bu substratların ışığının optik yoğunluğu veya absorbansı bir ELISA plaka okuyucusu ile ölçülür. OPD'nin ışık emiciliği 490 nanometre (nm) dalga boyunda, TMB ise 450 nm'de ölçülür.
ELISA saptama basamağında kullanılan diğer bir yaygın enzim, alkalin fosfatazdır. Bu enzim, p-nitrofenil fosfat (PNPP) substratı ile birlikte kullanılır ve ayrıca sarı bir çözelti üretir. PNPP, 405 nm dalga boyunda ışığı emer.
Enzim substrat kombinasyonlarının seçimi genellikle ticari olarak piyasada bulunan enzim etiketli antikorların yanı sıra ışık emilimini ölçmek için hangi ekipmanın kullanılacağına dayanır. ELISA tespiti için mevcut olan birçok kombinasyon, ELISA testini çok yönlü kılar. Hastalık test ve araştırma laboratuvarlarında önemli bir araçtır.
