Bir enzime bağlı immünosorbent deneyi (ELISA), antijenleri veya antikorları tespit etmek için immünolojide kullanılan yaygın bir testtir. Antijenler bağışıklık sistemi reaksiyonunu tetikler - başka bir deyişle hastalıklara neden olurlar. ELISA, insan immün yetmezlik virüsü (HIV), sıtma, kolera, kızamık ve kabakulak dahil olmak üzere birçok bakteri ve virüs antijenini tespit etmek için kullanılır. Bu ve diğer birçok patojene karşı antikorları tespit etmek için biraz farklı bir ELISA protokolü kullanılabilir. Bir ELISA protokolü, belirli bir ELISA'yı gerçekleştirmek için adım adım prosedürdür.
ELISA protokolü hafifçe değişmekle birlikte, gerçekleştirilen ELISA türüne bağlı olarak, temel kavram hepsi için aynıdır. ELISA, aynı zamanda antiglobulinler olarak da adlandırılan enzime bağlı antikorlara bağlıdır. Bu antiglobülinlere bağlanmış bir sinyal molekülü, istenen antijen veya antikor mevcutsa, test sırasında renk değiştirmesi için eklenen bir substrata neden olur. Mevcut antijen veya antikor miktarı, bir elektronik plaka okuyucu ile ölçülebilen renk değişim miktarıyla orantılıdır.
Üç ana ELISA tipi vardır. Doğrudan bir ELISA, antikorlardan ziyade antijenleri saptamak için kullanılır. En basit ELISA protokolüdür, çünkü enzim bağlı antikor doğrudan istenen antijene bağlanır. Mevcut antijen miktarını belirlemek için substrat eklenir.
Antikorları saptamak için dolaylı bir ELISA kullanılırken, antijenleri saptamak için bir başka dolaylı ELISA türü (bir sandviç ELISA olarak adlandırılan) kullanılabilir. Bir sandviç ELISA protokolü, istenen antijene bağlanmak için yakalama ve tespit antikorları adı verilen iki antikor gerektirir. Tespit antikoruna bağlanan bir antiglobulin eklenir ve alt tabaka eklenir. Dolaylı ELISA benzer bir protokol izler, ancak istenen antikoru tespit etmek için bir yakalama antikorundan ziyade bir yakalama antijeni kullanır.
Rekabetçi ELISA, düşük konsantrasyonlarda bulunan antijenleri tespit etmek için kullanılır, çünkü çok hassas bir tahlildir. Diğer ELISA protokollerinin aksine, rekabetçi ELISA, bir antikor yerine enzim bağlı bir antijen ve biraz farklı bir miktar belirleme yöntemi kullanır. İçinde, saptanacak antijeni ve enzime bağlı antijeni içeren numunenin her ikisi de bir antikora eklenir ve iki antijen, antikor bağlama bölgeleri için rekabet eder. Substrat eklendiğinde renk değişikliği daha büyüktür, bağlı enzim bağlı antijenlerin bağlı örnek antijenlere oranı daha yüksektir. Bu, daha yüksek renk değişiminin, numune antijeninin düşük konsantrasyonlarında tespit edildiği anlamına gelir; bu, bu yöntemi bu kadar hassas kılan şeydir.
