Was ist ein Nordpflot?

Die Hybridisierung von Northern Blot ist eine Technik, mit der Messenger -RNA -Spiegel (mRNA) in einer Probe nachgewiesen und die vorhandene Menge an mRNA quantifiziert werden können.Obwohl weitere leistungsstärkere Techniken existieren, bleibt Northern Blot aufgrund seiner Einfachheit und Benutzerfreundlichkeit der Standard.Die Northern Blotting -Technik ermöglicht auch einen direkten Vergleich mehrerer Proben in einem einzigen Experiment.

Messenger -RNA ist eine Art Nukleinsäure, der produziert wird, wenn ein Gen exprimiert wird.Ein Gen, das in einer Zelle eingeschaltet und funktionell ist, wird in mRNA transkribiert.Die mRNA wird dann in das Zytoplasma der Zelle transportiert, wo sie in ein Protein übersetzt wird.Die Northern -Blotnach Größe getrennt werden.Proben von mRNA -Molekülen bekannter Größen werden gleichzeitig durchgeführt, um eine Kontrolle zu liefern.Sobald die Elektrophorese abgeschlossen ist, werden die Proben auf einer festen Membran übertragen und immobilisiert, typischerweise aus einem Material wie Nylon.Die Proben werden dann vor der Analyse einige Stunden lang radioaktiv markiertes Sonden ausgesetzt.Während der Analyse kann die mRNA, die mit einer radioaktiv markierten Sonde hybridisiert hat, unter Verwendung von Röntgenaufnahmen deutlich nachgewiesen werden.

Die Northern Blotting -Technik ermöglicht die Beobachtung der Genexpressionsmuster zwischen verschiedenen Gewebetypen.Messenger -RNA, extrahiert aus Zellen verschiedener Gewebe und Organtypen, können verglichen werden, und zelluläre Reaktionen auf Stress, Infektion und viele andere Stimuli können untersucht werden.Durch die Betrachtung von Unterschieden in der mRNA -Expression unter verschiedenen Bedingungen kann ein Wissenschaftler bestimmen, welche Arten von Proteinen eine Zelle als Reaktion auf bestimmte Reize produziert.Dies kann Hinweise auf Funktionen unbekannter Proteine oder bei bekannten Proteinen über Informationen über Zellreaktionen auf die betreffenden Reize liefern.

Zum Beispiel kann ein Northern -Blot zeigen, dass die Expression eines unbekannten Proteins als Reaktion auf das Vorhandensein eines spezifischen Toxins zunimmt.Es könnte dann theoretisiert werden, dass das Protein an der Reduzierung der Toxizität beteiligt ist, möglicherweise indem die Chemikalie aus der Zelle transportiert oder in einen Metaboliten umgewandelt wird.Wenn bekannte Proteine untersucht werden, kann das Dokumentieren von Änderungen der Proteinexpression Informationen über die Antwort selbst liefern.Wenn beispielsweise die Expression eines bekannten molekularen Transporters erhöht worden wäre, könnte bestätigt werden, dass die zelluläre Reaktion auf das Toxin darin besteht, das Toxin aus der Zelle zu transportieren.