Was ist Polyacrylamidgel?
Polyacrylamidgel ist eine Lösung, die üblicherweise bei der Elektrophorese verwendet wird. Der Prozess der Trennung von Molekülen oder Partikeln unterschiedlicher Größe, indem sie durch ein Gel geleitet und elektrischen Strom angewendet werden. Es gibt verschiedene Rezepte für Polyacrylamidgel, enthält jedoch typischerweise Acrylamid, Wasser, einen Puffer, Ammonium -Persulfat (APS) und Tetramethylethylethiamin (temed). Dieses Gel fungiert als eine Matrix, die Verbindungen basierend auf ihrer Ladung und Größe unterteilt; Je mehr Acrylamid in der Gellösung, desto bessere Trennung kleinerer Moleküle. Typischerweise wird dieses Gel für die Protein- und DNA -Trennung verwendet.
In der Elektrophorese bewegt sich ein elektrisches Feld geladene Partikel durch ein Gel, das wie ein Sieb funktioniert, um die unterschiedlichen Partikel zu trennen. Das Gel absorbiert jede Wärme, die aus dem elektrischen Strom erzeugt wird. Polyacrylamidgel wird häufig in diesem Verfahren verwendet, aber Agarose, eine andere Chemikalie, die ein ähnliches Gel erzeugt, kann ebenfalls verwendet werden.
Gele CAN aus unterschiedlicher Konzentration bestehen, wobei die Menge an Acrylamid zwischen etwa 6% bis 15% liegt. Beim Mischen des Gels ist das Acrylamid unpolymerisiert, was bedeutet, dass es als einzelne Moleküle bleibt. Die Zugabe anderer Chemikalien, die die Bindung fördern, wie z. B. temed, veranlasst die Moleküle, die lange Ketten bilden - den "Poly" -Teil von Polyacrylamid.
Der Hauptvorteil des Polyacrylamidgels besteht darin, dass die Anzahl der Verknüpfungsbindungen und die Härte basierend auf der anfänglichen Menge an Acrylamid und temed hinzugefügt werden können. Ein Hauptfaktor bei der Konzentration von Acrylamid ist die Größe des analysierten Moleküls. Je kleiner die zu getrennten Verbindungen sind, desto mehr Acrylamid ist erforderlich. Sehr kleine Partikel werden unter Verwendung der höchsten Konzentration von 15 Prozent getrennt.
Acrylamid funktioniert, indem die Reibung im Gel kontrolliert wird; Die Härte des Gels bestimmt die Menge an HutIon. Große Verbindungen, die sich groß befinden, bewegen sich langsamer durch das Gel, da es aufgrund ihrer Größe natürlich mehr Reibung oder Widerstand gibt. Kleinere Verbindungen bewegen sich schneller, da weniger Reibung besteht. Um zu verhindern, dass kleine Verbindungen das Gel abziehen, wird mehr Acrylamid hinzugefügt, um mehr Reibung zu erzeugen.
DNA -Polyacrylamidgel werden verwendet, um DNA -Stränge unterschiedlicher Länge zu trennen. DNA -Stücke werden sich um nur ein Nukleotid trennen, die Verbindungen, aus denen jeder Strang besteht. Um zu wissen, welche Teile auf die spezifischen Größen beziehen, wird ein Standard, der Fragmente einer bekannten Größe enthält, häufig zusammen mit Proben ausgeführt. Die DNA -Teile werden dann mit dem Standard verglichen und die Größe des Strangs wird bestimmt.
Ein ähnliches Verfahren wird verwendet, um die Größe von Proteinen zu bestimmen, meistens diejenigen im Blut. Blut enthält zwei Haupttypen von Protein: Globulin, ein großes Protein und ein Serumalbumin, ein sehr kleines, negativ geladenes Protein. Trennung unter Verwendung von Polyacrylamidgel sind wirED, um die Menge jedes Typs zu bestimmen.