Was ist Polyacrylamidgel?
Polyacrylamidgel ist eine Lösung, die üblicherweise bei der Elektrophorese verwendet wird. Der Prozess der Trennung von Molekülen oder Partikeln unterschiedlicher Größe, indem sie durch ein Gel geleitet und elektrischen Strom angewendet werden.Es gibt verschiedene Rezepte für Polyacrylamidgel, enthält jedoch typischerweise Acrylamid, Wasser, einen Puffer, Ammonium -Persulfat (APS) und Tetramethylethylethiamin (temed).Dieses Gel fungiert als eine Matrix, die Verbindungen basierend auf ihrer Ladung und Größe trennt.Je mehr Acrylamid in der Gellösung, desto bessere Trennung kleinerer Moleküle.Typischerweise wird dieses Gel für die Protein- und DNA -Trennung verwendet.
Bei der Elektrophorese bewirkt ein elektrisches Feld geladene Partikel durch ein Gel, das wie ein Sieb funktioniert, um die unterschiedlichen Partikel zu trennen.Das Gel absorbiert jede Wärme, die aus dem elektrischen Strom erzeugt wird.Polyacrylamidgel wird üblicherweise in diesem Verfahren verwendet, aber Agarose, eine andere Chemikalie, die ein ähnliches Gel erzeugt, kann ebenfalls verwendet werden.Beim Mischen des Gels ist das Acrylamid unpolymerisiert, was bedeutet, dass es als einzelne Moleküle bleibt.Die Zugabe anderer Chemikalien, die die Bindung fördern, wie z. B. temed, veranlasst die Moleküle, die sich mit langen Ketten und Mdash verbinden.Der Poly -Teil von Polyacrylamid.
Der Hauptvorteil des Polyacrylamidgels besteht darin, dass die Anzahl der Verknüpfungsbindungen und die Härte basierend auf der anfänglichen Menge an Acrylamid und temed hinzugefügt werden können.Ein Hauptfaktor für die Acrylamidkonzentration ist die Größe des analysierten Moleküls.Je kleiner die zusammengetrennten Verbindungen sind, desto mehr Acrylamid wird benötigt.Sehr kleine Partikel werden unter Verwendung der höchsten Konzentration von 15 Prozent getrennt.
Acrylamid funktioniert, indem sie die Reibungsmenge im Gel kontrollieren.Die Härte des Gels bestimmt die Reibung.Große Verbindungen, die groß sind, bewegen sich langsamer durch das Gel, da es aufgrund ihrer Größe natürlich mehr Reibung oder Widerstand gibt.Kleinere Verbindungen bewegen sich schneller, da weniger Reibung besteht.Um zu verhindern, dass sich kleine Verbindungen vom Gel bewegen, wird mehr Acrylamid hinzugefügt, um mehr Reibung zu erzeugen.
DNA -Polyacrylamidgel wird verwendet, um DNA -Stränge unterschiedlicher Länge zu trennen.DNA -Stücke trennt sich um nur ein Nukleotid, die Verbindungen, aus denen jeder Strang besteht.Um zu wissen, welche Teile auf die spezifischen Größen beziehen, wird ein Standard, der Fragmente einer bekannten Größe enthält, häufig zusammen mit Proben ausgeführt.Die DNA -Stücke werden dann mit dem Standard verglichen und die Größe des Strangs wird bestimmt.
Ein ähnliches Verfahren wird verwendet, um die Größe von Proteinen zu bestimmen, meistens die im Blut.Blut enthält zwei Haupttypen von Protein: Globulin, ein großes Protein und ein Serumalbumin, ein sehr kleines, negativ geladenes Protein.Die Trennung unter Verwendung von Polyacrylamidgel wird verwendet, um die Menge jedes Typs zu bestimmen.