Mi az a rekombináns plazmid?

A plazmid egy kör alakú DNS -darab, amely sok baktériumban megtalálható.A plazmidok legfigyelemreméltóbb tulajdonsága az, hogy a gazdaszervezet fő DNS -től függetlenül replikálódnak.Gyakran egy plazmidot használnak rekombináns klónozási technológiában az újonnan izolált gének klónozására.Nagyon gyakori egy rekombináns plazmidot használni, hogy nagy mennyiségű ismert gént expresszáljon, hogy RNS -t vagy fehérjét kapjunk belőle.Az ilyen rekombináns gén expresszió nélkülözhetetlen volt a biotechnológiai ipar számára.Számos más típusú baktérium képes ilyen plazmidokat.Ezek az önmegtöltő DNS-bitek természetesen átvihetnek a különféle baktériumok között.Ennek ellenére néha nehéz volt a rekombináns plazmidokat más típusú baktériumokba bevezetni.

A DNS más sejtekbe történő bevezetésének elsődleges eljárását transzformációnak nevezzük, amelyben a baktériumokat olyan vegyi anyagokkal kezelik, amelyek miatt nagyobb valószínűséggel vesznek fel idegen DNS -t.Egy másik módszer magában foglalja a baktériumok elektromos árammal történő megdöbbentését.Ezt elektroporációnak nevezik. A rekombináns plazmid létrehozásának okai eltérőek.Gyakran, amikor a DNS -t először egy adott szövetből vagy szervezetből izolálják, azt plazmidokká alakítják, hogy könyvtárat hozzanak létre.Ezután a DNS extrahálható az egyes kolóniákból.Ezután DNS -szekvenálással szűrhetők meg, hogy meghatározzák, milyen típusú gének vannak jelen, ha a szekvenciák vannak jelen egy adatbázisban.Időnként ismeretlen funkciókkal rendelkező géneket klónoznak.A gént rekombináns plazmidokba klónozhatjuk, amelyek túlzott expressziós vektorok.Ezeket kifejezetten nagy mennyiségű RNS vagy fehérje előállítására tervezték.Ez különösen értékes volt a rekombináns humán fehérjék esetében, amelyek korábban csak a CADER -ekből álltak rendelkezésre, így nagyon megnehezítve egy adott gén funkciójának tanulmányozását.A plazmidnak választható markernek kell lennie.Ez lehetővé teszi egy sejt kiválasztását a génnel.Általában az a sejtek populációja, amelyben nincs gén, a markerrel, nagymértékben nem számolja el a hordozó sejtek mennyiségét.Általában egy rekombináns plazmid ellenáll az antibiotikumnak, vagy egy adott aminosav hiányában növekedhet.Ezenkívül egy rekombináns plazmidhoz speciális szekvenciák halmazához szükséges, hogy a restrikciós enzim hasítsa a DNS -t, hogy a gén beilleszthető legyen a klónozó vektorba.Számos restrikciós enzim létezik, amelyek rendkívül specializálódnak a specifikus DNS -szekvenciákhoz, amelyeknek jelen kell lennie, ahol a gén elindul és végződik.

A baktériumok hagyományos törzseit évtizedek óta használják a DNS klónozására.Ezenkívül vannak olyan új készletek, amelyek speciálisan épített baktériumtörzseket használnak a géntermék túlzott expressziójának megkönnyítésére.Egyesítik a gén klónozásának technológiáját olyan módszerrel, amely lehetővé teszi a génből expresszált fehérje könnyű tisztítását, miután azt a rekombináns plazmidba klónozták.