Ano ang isang electrophoretic mobility shift assay?

Ang isang assay ay isang pagsubok na idinisenyo upang paghiwalayin ang isang cell na orihinal na mga piraso sa mga bahagi na madaling makilala.Ang electrophoretic mobility shift assay ay isang eksperimento na gumagamit ng koryente upang ilipat ang macromolecules, tulad ng mga protina, sa pamamagitan ng isang gel matrix upang maging sanhi ng isang paghihiwalay sa pagitan ng iba't ibang mga macromolecules batay sa laki.Tulad ng isang baterya ng kotse, ang negatibo at positibong mga dulo ay nasa kabaligtaran ng mga panig ng electrophoretic mobility shift assay, o gel shift assay.Nagdudulot ito ng kuryente upang maakit ang macromolecules batay sa singil.Ang bawat macromolecule ay gumagalaw sa ibang rate, dahil ang mas maliit na mga nakakaranas ng mas kaunting pagkagambala mula sa gel.

Maraming mga hakbang ang kinakailangan upang mag -set up ng isang electrophoretic mobility shift assay.Ang mga macromolecules na kailangang paghiwalayin ay dapat na ihanda muna.Karamihan sa mga macromolecules ay nakuha mula sa mga nabubuhay na cell at nangangailangan ng mga tiyak na pamamaraan.Ang pagkuha ng mga bahagi na ihiwalay ay madalas na nangangailangan ng isang sentripuge at isang reaksyon ng kemikal na bumabagsak sa mga cell.Ang sentripuge ay iikot ang isang vial sa mataas na bilis at bumubuo ng isang pellet ng macromolecules na kinakailangan.Ito ay natunaw at madalas na isang kulay o iba pang label ay idinagdag upang makatulong na subaybayan ang gel shift assay.

Ang gel, kung minsan ay tinatawag na kama, ay dapat ding sariwang ginawa mula sa isang tumpak na halo ng pulbos na agarose at tubig na mabilis na lumiliko mula sa likido hanggang sa gel.Karaniwan ang isang electrophoretic mobility shift assay ay magkakaroon ng maraming mga linya para sa magkahiwalay na assays, na ginagamit upang ihambing ang iba't ibang mga mixtures ng macromolecule.Ang isang linya ay palaging itinatakda bilang isang kontrol at karaniwang may isang uri lamang ng macromolecule.Ang dami ng oras ng kapangyarihan ay tumutukoy sa paglipat ng kadaliang mapakali ng macromolecules.Mahalaga na paghiwalayin ang sapat na mga piraso para sa tamang pagsusuri.Kung ang kapangyarihan ay hindi maayos na na -time, ang mga paghahambing sa hinaharap ay hindi tumpak din.Ang direksyon ng macromolecules ay matutukoy sa pamamagitan ng kung anong singil ang nagtataglay ng natural at mdash;Karamihan sa paglipat patungo sa negatibong pagtatapos.

Ang mga simpleng pagsusuri sa genetic at pag -aaral ng protina ay karaniwang ginagawa sa isang electrophoretic mobility shift assay.Ito ay ipinapakita ng iba't ibang mga paglilipat sa iba't ibang mga linya.Kung nangyayari ang isang pakikipag -ugnay, pinagsama ang macromolecules at tumatakbo nang mas mabagal sa pamamagitan ng matrix kumpara sa control lane na may isang macromolecule lamang.Ang mga gel shift assays ay ginagamit upang mabilis na maalis o kumpirmahin ang mga resulta ng genetic na ang mga kumplikadong pamamaraan ay maaaring mas matagal upang makumpleto.Maaari rin nilang matukoy kung ang mga antibodies, isang immune system macromolecule, ay dumikit sa mga protina na maaaring magamit upang labanan ang bakterya at mga virus.