Qu'est-ce que la purification peptidique?

Les peptides sont de petits polymères composés d'acides aminés.Beaucoup sont biologiquement actifs comme hormones, toxines ou ont d'autres capacités.Ces composés sont fréquemment utilisés dans la recherche biologique, médicale et chimique.Ils servent également de éléments constitutifs des protéines lorsque des nombres d'entre eux sont liés.La purification des peptides est une technique utilisée pour purifier les grandes quantités d'un peptide souhaité, soit pour aider à séparer les peptides générés par la digestion des protéines.

La purification des peptides est réalisée en utilisant une technique de chromatographie, une façon de séparer les composés qui se lientdifférentiellement à une matrice physique.La chromatographie liquide à haute pression (HPLC) est couramment utilisée pour la purification des peptides.Le peptide ou les peptides sont appliqués dans un mélange de solvants qui change dans le temps car ils sont pompés à travers une colonne de petites perles à haute pression.Différents peptides s'éteignent à différents moments et sont détectés par un moniteur, souvent un spectrophotomètre UV.

Lors de la recherche de recherches sur les peptides, la substance d'intérêt est souvent rare et ne peut pas être achetée auprès de sociétés chimiques.Si la structure du peptide souhaité est connue, il est souvent plus facile de préparer chimiquement par synthèse du peptide que d'isoler le composé à partir de sources naturelles.L'isolement des produits naturels est notoirement difficile.Les peptides synthétiques sont généralement purifiés par HPLC.

Une telle synthèse chimique peut être intimidante pour un chercheur indépendant qui n'est pas chimiste.Souvent, cette tâche est sous-traitée aux sociétés de synthèse des peptides spécialisées dans ces techniques.Cela peut être plus économique que d'essayer de mettre en place le système à partir de zéro dans un laboratoire.Les entreprises peptidiques peuvent faire des peptides personnalisés adaptés aux besoins du chercheur.

Une autre raison de la purification des peptides peut être lorsqu'un chercheur a purifié une protéine et essaie de déterminer son identité.Il ou elle peut dégrader la protéine en fragments de peptides, séparer les fragments par purification et avoir le modèle de fragmentation des peptides détecté par un spectromètre de masse lorsqu'ils éluent de la colonne.Cette technique est connue sous le nom de LC-MS, abrégé pour la chromatographie liquide-spectrométrie-masse.Il donne le poids moléculaire et la composition des acides aminés des fragments, et permet souvent l'identification de protéines, si des plus similaires ou identiques ont été identifiées précédemment.

De nombreux chercheurs travaillent avec des peptides qui ont de nouvelles caractéristiques, telles que les acides aminés non naturels, àEssayez d'en trouver ceux avec des activités biologiques inhabituelles.Il y a un champ entier appelé peptidomimétique consacré à l'étude de ces nouveaux peptides.Souvent, les séquences générées par ordinateur sont conçues et une bibliothèque de peptides est synthétisée qui englobe une gamme de peptides atypiques.La purification des peptides est utilisée pour séparer les membres individuels de cette bibliothèque pour fournir un peptide pur pour tester l'activité biologique.Cette stratégie a réussi à générer au moins un nouveau médicament disponible commercialement.

De nombreux peptides biologiquement actifs sont intéressants pour les utilisations médicales.Les composés utilisés commercialement, tels que l'insuline, sont généralement produits par des systèmes de surexpression d'ADN recombinants qui génèrent de grandes quantités du composé souhaité.Souvent, les peptides sont génétiquement modifiés pour faciliter la purification en ayant une sorte d'étiquette ajoutée à leurs fronts.Cela permet d'utiliser une chromatographie d'affinité pour purifier le peptide.

Avec ce type de chromatographie, la balise est un composé, comme l'histidine, qui liera une matrice de billes, comme le nickel, choisie pour sa capacité à lier l'étiquette.Les protéines et les peptides indésirables passent généralement à travers la colonne sans liaison.Le peptide spécifiquement conçu se lie généralement fortement à la colonne.Une fois que les protéines et peptides contaminants ont été lavés, le peptide souhaité est élué par un composé qui rivalise pour la liaison à tIl matrice.L'un a alors une préparation assez pure du peptide souhaité, et l'étiquette peut être retirée par clivage.