Co je to genová knihovna?

Knihovna genu je termín pro sbírky fragmentů deoxyribonukleové kyseliny (DNA), které byly náhodně klonovány z genomů organismů.Jsou klonovány jako plazmidy, které se mohou replikovat odděleně od jejich chromozomů a fágů, které jsou parazitickým virem, který se živí bakteriemi.Když je klonován jako plazmidy, je sbírka hostitelských buněk a každá z buněk obsahuje fragment DNA.Knihovny fágových genů se skládají z toho, co se nazývají fágové lyzáty, což jsou zbytky zničených buněk s fragmentem DNA.Když genové knihovny obsahují sbírku všech genetických informací o organismu, jsou považovány za reprezentativní genovou knihovnu.Rekombinantní vektory jsou známé jako genová knihovna CRNA.Screening genové knihovny najde konkrétní buňky obsahující klonovací vektory s konkrétním genem, který se vyhledává v genové knihovně, a poté používá jednu z mnoha technik jejich izolace a sklizně.Po sklizni jsou buňky považovány za klonované.Abychom měli přiměřenou šanci na izolaci a klonování konkrétního genu, obvykle se používají pouze reprezentativní genové knihovny jako každý gen a každý původní fragment DNA konkrétního genomu v něm se shromažďuje.Abychom dosáhli 99% šance na lokalizaci konkrétního lidského genu pro klonování, bylo by třeba prověřit více než 600 000 klonovaných buněk, aby bylo možné najít požadovaný gen z reprezentativní genové knihovny..Knihovna je strukturována tak, aby organizovala DNA a její tisíce různých genů.Knihovna se stává sbírkou desítek tisíc kolonií bakterií, z nichž každá je modulována fragmentem DNA z organismu, který obsahuje gen zvláštního zájmu.Knihovny také obsahují restrikční enzymy a plazmid.Restrikční enzymy se používají ke čtení informací o nukleotidech DNA a používají se k snížení DNA na fragmenty oddělením nukleotidů od sebe.

Stejné restrikční enzymy řezují bakteriální plazmidy a fragmenty a plazmidy jsou kombinovány ve zkumavce, aby se kombinovaly, což vytváří novou kombinaci.Tyto rekombinantní plazmidy se pak vrátí zpět do kultury bakterií pomocí tepelného šoku nebo elektroporace.Tyto kroky se provádějí znovu a znovu, dokud nebude vytvořena celá genová knihovna pro konkrétní genomový organismus ze všech fragmentů původní extrakce DNA.