Co je detekce ELISA?

Enzym spojený imunosorbent test (ELISA) je test prováděný v imunologické laboratoři pro stanovení hladin proteinu v biologickém vzorku.Detekce ELISA se týká posledního kroku testu, ve kterém je do plastové desky obsahující vázanou protilátku značenou enzym přidán jasný roztok nebo substrát.Enzym štěpí substrát a dochází ke změně barvy.Absorbance světla konečného barevného roztoku se pak měří na čtečce destiček ELISA nebo spektrofotometru.Nepřímá ELISA se používá k detekci proteinu, známého jako protilátka, v séru pacienta.Příkladem nepřímého testu ELISA je test viru lidské imunodeficience (HIV) používaný k detekci protilátek proti HIV.Test sendvičového ELISA detekuje protein nebo antigen, zachycení mezi dvěma protilátkami.Detekce hormonu lidského chorionického gonadotropinu (HCG), která je zvýšena během těhotenství, se provádí sendvičovým testem ELISA.

Oba testy mají na konci testu krok detekce ELISA.Tento krok zahrnuje přidání protilátky, která má k ní připojenou molekulu enzymu.Po přidání enzymově značené protilátky se přidá bezbarvý roztok obsahující molekulu substrátu specifickou pro tento enzym.Enzym štěpí molekulu substrátu a roztok mění barvu v závislosti na použité kombinaci.Stanovení množství protilátky nebo antigenu ve vzorku pacienta se provádí měřením intenzity změny barvy.

V kroku detekce ELISA je k dispozici několik kombinací substrátu enzymů.Nejběžnějším enzymem je křenová peroxidáza (HRP), která může mimo jiné štěpit molekuly substrátu ortho-fenylemendiamin dihydrochlorid (OPD) a tetramethylbenzidin (TMB).Štěpení OPD i TMB má za následek žlutou barvu a optická hustota nebo absorbance světla těchto substrátů se měří pomocí čtečky destiček ELISA.Absorbance světla OPD se měří na vlnové délce 490 nanometrů (NM), zatímco TMB se měří při 450 nm.Tento enzym se používá se substrátem p-nitrofenylfosfátem (PNPP) a také produkuje žlutý roztok.PNPP absorbuje světlo při vlnové délce 405 nm.Mnoho kombinací dostupných pro detekci ELISA činí test ELISA velmi všestranným.Je to důležitý nástroj při testování nemocí a výzkumných laboratořích